Цены снижены! Бесплатная доставка контурной маркировки по всей России

Тест ламп н7: Тест ламп ближнего света (H7)

Содержание

10 лучших ламп H7 — Рейтинг 2020 года (Топ 10)

Отказ от совмещения ближнего и дальнего света в одной лампе для автомобилестроения уже стал нормой – соответственно, и лампы с цоколем H7 (ближний свет) стали одними из самых востребованных, особенно после введения в ПДД пункта об обязательной езде с включенными фарами и днем. При этом, покупая новый комплект ламп, можно задуматься – «А не купить ли что-то поярче? Или, может быть, вот эти светодиодные лампы?»

Но тут есть одно «но». Позволить себе рекомендовать лампы, неспособные обеспечить нормальное светораспределение согласно нормам, мы не можем – «недосвечивающая» обочину или бьющая в лицо встречному потоку лампа просто опасна. Поэтому даже не любая «галогенка» заслуживает покупки, хотя автомобильная оптика рассчитывается именно под их конструкцию. Светодиодные же и ксеноновые лампы заслуживают «права на жизнь» только в оптике, изначально рассчитанной на них – а таких фар с цоколевкой лампы H7 физически не существует (кроме китайских авторынков, хе-хе). И стоит с понятным скепсисом отнестись к любителям утверждать «мол, у меня в линзовых фарах ксенон светит как надо!»: на стенде от таких утверждений не остается ни следа. А на дороге с качественными «галогенками», как ни странно, освещенность дороги запросто оказывается лучшей, чем с «колхозным» ксеноном – жаль, что не все это до сих пор понимают.

И, наконец, не забудем о существовании в КоАП статьи 12.5, которая в своей третьей части прямо обещает лишение прав на срок до одного года за использование, в том числе, и ламп, не соответствующих типу оптики – а под это ограничение попадают и ксенон, и светодиодные лампы с цоколем H7.

Рейтинг лучших ламп H7 — Топ 10

Как выбрать хорошие лампы ближнего света?

Однозначное «нет» при выборе ламп, и не только конкретно с цоколем H7 – это прямые указания на упаковке наподобие «for off-road use only» или тем более «не для продажи в Европе»: проще говоря, такие лампы светят настолько криво, что сам производитель указывает на невозможность их законного применения на дорогах общего пользования.

Причем, скорее всего, светораспределение будет нарушено именно в зоне встречной полосы.

Лампы с «повышенной светимостью» могут привлекать взгляд громкими обещаниями, но тут нужно учесть несколько моментов. При равной электрической мощности заставить нить накаливания светить ярче можно только ценой снижения ее ресурса, она и перегорит быстрее, и к тряске будет более чувствительна. К тому же вырастет доля ультрафиолетового спектра, которую тонкое стекло колбы будет гасить не в полной мере – это уже ускорит старение пластикового рассеивателя. И все так же нужно обеспечить правильную геометрию лампы (в первую очередь – расположение нити относительно цоколя), иначе от нее не добиться правильного распределения света в автомобильной фаре. Далеко не у всех производителей автомобильных ламп это удается в полной мере.

Если же мощность, указанная на упаковке, отличается от стандартных для Н7 55 Вт, то стоит все же посмотреть на другую лампу: перегрев проводки и самой фары, обгорание контактов в разъеме – это уже знакомые для любителей «экспериментов» вещи, доводилось иногда видеть, и как сама лампа «стекает» подобно часам Дали внутри фары. И было бы ради чего: светят такие лампы часто даже хуже «обычных».

Удачных покупок!

Тест ламп H7 — мы проверили, какие лампы лучше всего

В ходе испытаний на официальное утверждение следует проверить, что нить накала имеет правильную геометрию и что она излучает необходимое количество света. К сожалению, лампы, представленные производителем для одобрительных испытаний, могут быть (и часто) выбраны или специально изготовлены для испытаний. То, что идет на прилавки магазинов, может иметь совершенно другое качество. Второй вопрос — эффективность лампочек на практике. Незначительные изменения в конструкции нити, которые находятся в пределах нормы, могут привести к значительному улучшению освещения дороги — в любом случае, обещают производители.

Мы проверили эффективность ламп в отражателе с эллипсоидальной линзой с хорошими параметрами и чувствительностью к качеству источника света, хотя блики для этого отражателя увеличиваются меньше после использования плохих ламп, чем в «отражающей» конструкции — в противном случае результаты могут быть хуже. Исследование проводилось в Институте автомобильного транспорта в Варшаве в рамках исследовательского проекта ITS и кампании «Просвещение» фонда «Поезжай безопасно». Примечание: мы не проверяли, соответствуют ли лампы стандартам одобрения, только то, как они освещают дорогу на практике.

Лампа является важным, но только одним из элементов фар. Та же лампочка, вставленная в другую лампу, будет освещать дорогу лучше или хуже.

Это работает наоборот: хорошая фара может плохо, правильно или идеально освещать дорогу — в зависимости от используемой лампы. В исключительных случаях может случиться так, что неправильная геометрия филамента перекрывает геометрический дефект рефлектора, и эффект освещения будет правильным. Однако это редко.

Интересным фактом является качество лампочек, установленных в автомобилях на заводе (OEM). Не секрет, что производители фар для первой сборки и автомобилей предъявляют к производителям лампочек требования гораздо более строгие, чем омологация. Следовательно, «другие» лампочки, которые сходят с производственных линий и все еще отвечают требованиям по сертификации, но не настолько точны, появляются на рынке как запасные части.

Это может быть аналогично лампам накаливания с повышенной эффективностью (например, + 120%), качество которых может варьироваться в зависимости от местоположения распределения. Покупатель лампочек не может их проверить, и, как показывают результаты нашего теста, они могут сильно отличаться, например, правильно подобранная стандартная лампочка может быть лучше, чем лампочка «среднего» типа «+ 100%».

Подробные результаты нашего теста на лампы H7 можно найти в галерее.

Проверьте цены на лампочки на Skąpiec.pl!

Bosch Xenon Silver H7 12V 55W [Sprawdź cenę]

Osram Xenarc 35W P32d-2 (D2S) [Sprawdź cenę]

LED Halogen H7 21SMD 3535 CHIP 10-30V [Sprawdź cenę]

Philips X-tremeVision h5 P43t 2 szt. [Sprawdź cenę]

Osram h5 12V 60/55W P43t Night Breaker Unlimited [Sprawdź cenę]

LED #LJ17 white h5-1210-120 [Sprawdź cenę]

Bosch Plus 90 H7 12V 55W (2 szt.) [Sprawdź cenę]

Osram standardowa żarówka halogenowa H7 [Sprawdź cenę]

Osram Night Breaker H7 [Sprawdź cenę]

Philips X-treme Vision Plus 130% h5 12V 60/55W (2 szt.

) [Sprawdź cenę]

Тест светодиодных ламп Philips H7

Пришло время очередного теста светодиодные ламп, где мы посмотрим, как светят три линейки светодиодов Philips в цоколе H7 и сравним их по качеству и силе света.

В тесте принимали участи следующие лампы:


Стенд для тест светодиодных ламп.

Галоген мы использовали в качестве наглядной демонстрации того, что данный тип ламп уже очень сильно устарел, и если вы еще ездите на галогеновых лампах, то после данного теста наверняка задумаетесь об их замене на светодиодные.

Установленная в линзу галогеновая лампа.

Для теста мы использовали бигалогенную линзу Hella 3R

Halogen, закрепленную на дощечке – такую системы мы уже использовали для своего теста ксеноновых ламп D2S, но уже с биксеноновой линзой. Лампы в линзу устанавливаются очень просто: сзади имеется защелка, которая прочно удерживает лампочку в билинзе.


Тест галогеновых ламп Philips H7

В первую очередь смотрим на светотеневую границу галогеновых ламп Philips H7 – слабенько, но другого ничего ожидать не следовало. СТГ идет тоненькой линией, заливка плохая, свет совершенно неинтересный.

Тест силы света Philips H7.

Показатели следующие: по центру светотеневой границы 0.62 килолюкса, боковая засветка – 0.65 килолюкса. Распределение светового пучка идет плохо, поэтому ставить данные лампы в головной стоит только в крайнем случае (другое дело желтый галоген в ПТФ, но там и цоколь обычно другой). 


Тест светодиодных ламп Philips Ultinon LED H7

Установка светодиодной лампы Philips Ultinon LED H7 в галогеновую линзу.

Теперь поменяем галогенку на светодиодную лампу Philips Ultinon LED H7 – для этого потребуется открутить радиатор на лампе, установить ее аналогично галогеновой и закрутить радиатор. Не стоит беспокоиться, что из-за своего размера лампа может не поместиться в фару, пространства для нее будет достаточно. 

Светодиодная лампа Philips Ultinon LED H7 в линзе.

Обратите внимание, что светодиодные лампы необходимо ставить вертикально, как на фото, чтобы добиться правильного света.

Тест светодиодных ламп Philips Ultinon LED H7.


Светотеневая граница намного интересней, но все равно пучок света рассеивается не очень хорошо, есть немного нижней засветке. Показатели люксметра: 1.85 килолюкса по центру, при удалении датчика в сторону сила света падает до 1.40 килолюкса, боковая засветка – 0.94 килолюкса.


Тест светодиодных ламп Philips X-Treme Ultinon H7

Установка светодиодной лампы Philips X-Treme Ultinon H7 в галогеновую линзу.

Следующей лампой в тесте будет Philips X-Treme Ultinon H7, являющейся старшей линейкой, предшествующей в нашем тесте светодиодной лампе. И тут мы сразу же видим отличную по заливке светотеневую границу, единственное, что можно было бы снизить засветку снизу и сбоку, добившись тем самым большей плотности света по центру.

Тест светодиодных ламп Philips X-Treme Ultinon H7.


Измеряем силу света: 3.25 килолюкса в центре СТГ, по мере удаления от центра сила света снижается до 1.93 килолюкса, боковая засветка – 1.83 килолюкса.


Тест светодиодных ламп Philips X-tremeUltinon LED gen2 H7

Теперь посмотрим на нашу новинку, ради которой и затевался наш тест светодиодных ламп H7.

Демонстрация конструкции светодиодной лампы Philips X-tremeUltinon LED gen2 H7.

Светодиодные лампы Philips X-tremeUltinon LED gen2 H7 сразу же порадовали нас новыми улучшенными разъемами проводки.

Установка светодиодной лампы Philips X-tremeUltinon LED gen2 H7 в галогеновую линзу.

Смотрим на светотеневую границу: практически идеал, что выражается почти в нулевой нижней засветке и слабой боковой – пучок света сконцентрирован по центру, дальний свет также хороший.

Светотеневая граница ближнего и дальнего света светодиодной лампы Philips X-tremeUltinon LED gen2 H7.

Показатели люксметра следующие: по центру 2.75 килолюкса, слева 0.82 килолюкса, справа 0.74 килолюкса. Лампа светит несколько слабей (на 0.5 килолюкса) предыдущей Philips X-Treme Ultinon, но зато мы получили более правильное распределение света, что в итоге выигрышней, нежели слегка большая яркость при увеличенной боковой засветке.

Тест светодиодных ламп Philips X-tremeUltinon LED gen2 H7.

По итогам можно сказать, что мы полностью довольны результатом теста новых светодиодных ламп Philips X-tremeUltinon LED gen2 H7. Светодиодные лампы Philips отлично зарекомендовали себя в сложных погодных условиях и, разумеется, мы рекомендуем их к установке.

Записаться на установку светодиодных ламп

В нашем автосервисе Вы можете заказать не только замену ламп, но и произвести замену или ремонт фар и отдельных элементов автомобильного освещения, а также установить парктроники или наклеить тонировочную пленку быстро, качественно и недорого – обращайтесь!

Список и стоимость выполненных работ

Лучшие лампы H7 для автомобиля 2020 года: рейтинг галогеновых, ксеноновых и светодиодных моделей (топ-10) | Мой выбор

Для безопасности дорожного движения в темное время суток важно, чтобы у автомобиля было качественное освещение. Благодаря ему обеспечивается комфортная езда, хорошая видимость дороги ночью и в непогоду. Если свет подобран неправильно, возрастает риск аварийной ситуации.

Мы решили составить рейтинг, определив лучшие лампы H7 2020 года. Сравнить модели топ-10 нам помогал консультант магазина «Автоколесо» Константин Твилов.

Производители автомобильных аксессуаров предлагают большой выбор лампочек. Не зная тонкостей выбора, сложно подобрать действительно качественную модель.

В рейтинг ламп H7 вошли самые долговечные и яркие модели для ближнего и дальнего света:

Osram ULTRA LIFE H7 64210ULT-HCB 12V 55W 2 шт;
Philips Vision Plus 12972VPS2 H7 55W 2 шт;
Bosch Xenon Blue 1987301013 H7 12V 55W 1 шт;
Osram LEDriving HL H7 65210CW 14W 12/24V 2 шт;
Bosch Pure Light 1987301012 H7 12V 55W 1 шт;
Philips Diamond Vision 12972DVS2 H7 55W 2 шт;
General Electric Megalight Plus 58520MPU H7 12V 55W 2 шт;
KOITO Whitebeam III H7 P0755W 4200K 12V 55W (100W) 2 шт;
Recarver Type F H7 7000 lm 6000K RECTFLED0H7-6-2canbus 2 шт;
Vizant 4H7 H7 4300K 2 шт.

галогеновая лампа H7 для ближнего и дальнего света Osram ULTRA LIFE H7 64210ULT-HCB 12V 55W

  • гарантия – 4 года;
  • температура света – 3200К;
  • мощность – 55 Вт;
  • галогенная;
  • поток – 1500 лм.

Топ, в котором представлены лучшие галогеновые лампы H7 возглавила модель Osram ULTRA LIFE от немецкого бренда. Их ресурс в три раза больше, чем у обычных. Срок эксплуатации составляет 4 года. Подходят для фар ближнего и дальнего освещения. Мощность – 55Вт, показатель светового потока – 1550 лм, хорошо видны на дальней дистанции.

Не приносят дискомфорта зрению водителей встречных машин, лучше конкурентов светят в плохую погоду. Сделаны из термоустойчивого материала. Если вы не можете определиться, какие лампы ближнего света H7 самые лучшие, посоветуем рассмотреть эту модель.

Рекомендуется тем, кто ищет надежные, долговечные лампы для фар, с мощным ресурсом и ярким, ровным светом.

Отзывы

Водителям нравится долговечность, свет, мощность. Вблизи светят лучше, не причиняют вреда зрению встречных водителей.

Плюсы:

  • долговечность;
  • гарантия 4 года;
  • мощность;
  • белый свет.

Минусы:

  • не обнаружены.

Лучшая лампа H7 в противотуманные фары Philips Vision Plus 12972VPS2 H7 55W

  • галогеновая;
  • мощность – 55Вт;
  • теплый белый свет;
  • температура – 3250К;
  • поток – 1500 лм.

Модель входит в рейтинг ламп H7 благодаря мощному световому потоку. Способна увеличить дальность освещения. По сравнению со штатной галогеновой, светит более чем на 60% ярче. Сделана из прочного кварцевого материала, с фильтром от ультрафиолетового излучения. Крепко сидит в цоколе, не подвержена вибрациям, давлению, а также смене температурного режима.

Напряжение и мощность составляют 12v 55w. Цветовая температура – 3250 К, поток – 1500 лм. Срок службы – 400 часов. Создают равномерное освещенное дорожное полотно, теплого, белого свечения, тем самым снижают риск аварийных ситуаций.

Рекомендуется тем, кто ищет всесезонные лампочки с теплым белым светом, универсально подходящие под любые погодные условия (туман, снег, дождь).

Отзывы

Владельцы хвалят равномерность светового пучка, а также яркость. Не нравится короткий срок службы, высокая цена.

Плюсы:

  • яркость;
  • мощность;
  • универсально подходят для плохих погодных условий;
  • распределение света.

Минусы:

  • быстро изнашиваются;
  • высокая цена.

Лучшая светодиодная лампочка H7 Osram LEDriving HL H7 65210CW 14W 12/24V

  • универсальные;
  • с белым свечением;
  • яркие и мощные.

Светодиодная модель повышенной яркости. Расширенный конус света не ослеплят встречное движение. Даже на большом расстоянии обеспечивают четкую видимость объектов. Благодаря усовершенствованной технологии охлаждения, конструкция не подвержена перегревам.

Отличается универсальным дизайном, подходят для линзованных фар, штатной оптики и для всех видов автомобилей, включая минивэны и внедорожники. Эффективный дневной белый свет создает благоприятные условия в любую погоду и время суток. Мощность составляет – 14 Вт, температура – 6000К.

Рекомендована тем, кто хочет приобрести самые яркие лампы h7. Надежные, долговечные лампочки для линзованных фар.

Отзывы

Пользователям нравится легкая установка, яркость света, четкость обзора дорожного полотна и обочин. Из минусов отмечена высокая цена.

Плюсы:

  • повышенная яркость;
  • универсальность;
  • большой ресурс работы;
  • хорошо сформированная граница света и тени;
  • светодиодная.

Минусы:

Лучшая ксеноновая автолампа Bosch Xenon Blue 1987301013 H7 12V 55W

  • мощность – 55 Вт;
  • напряжение – 12 В;
  • яркие, с белым светом.

Ксеноновая лампа от фирмы Бош входит в топ благодаря ровному, контрастному освещению близкому к естественному дневному. Излучают на 50% больше света. Если такой элемент установлен на ваш автомобиль, то о видимости в плохую погоду можно не волноваться. С таким светом водители встречной полосы движения видят автомобиль на большом расстоянии.

Мощность составляет – 55 Вт, светят лучше стандартных галогеновых, при этом не напрягают зрение того, кто за рулем. На поверхность нанесено серебряное напыление, благодаря ему они незаметны в фарах.

Рекомендуется для автолюбителей, предпочитающих ксеноновый свет, не ослепляющий встречные машины, обладающий ровным световым пучком.

Отзывы

Владельцы хвалят ксенон h7 за качественное освещение пути в условиях недостаточной видимости. Нравится длительный срок службы, приятное глазу свечение. Существенных минусов нет.

Плюсы:

  • яркость;
  • ровный пучок;
  • хорошее освещение дороги;
  • не слепят встречный поток;
  • долгий срок службы.

Минусы:

Как выбрать автомобильную лампу H7

От головного освещения зависит безопасность на дороге. Если фары светят плохо, то водитель может не заметить пешехода или попасть в авариную ситуацию. Чтобы такого не возникло, важно правильно выбрать световой элемент для передних фар. Лампы H7 с мощным потоком света хорошо освещают при этом не ослепляют встречные автомобили.

Выбор должен основываться на интенсивности светового потока, комфортного для зрения, а также сроке службы. Перед приобретением лампы, важно знать какие подходят для вашего автомобиля.

Они бывают галогенные, светодиодные, ксеноновые, все модели имеют преимущества и недостатки, с которыми нужно ознакомиться перед покупкой:

  • Галогеновые – простые в установке в фары и использовании, но имеют короткий срок службы, подвержены перегревам. Колба выполнена из кварцевого стекла, со специальным газом и нитью накаливания.
  • Ксеноновые устойчивы к вибрациям, перегревам, но дорого стоят, а для работы требуют дополнительной установки устройств.
  • Светодиодные – led лампы h7 экономичны, интенсивно освещают, тест сравнение с элементами накаливания показал, что они не дают стабильный световой пучок. Такие элементы обеспечивают освещение только в определенном ракурсе.

Перед тем, как выбрать автомобильную лампу H7, необходимо обратить внимание на параметры, характеризующие осветительные приборы:

  • долговечность;
  • стоимость;
  • яркость светового потока;
  • комфортность освещения.

В рейтинг производителей автоламп H7 входят: Osram, Philips, Bosch, General Electric, KOITO Whitebeam, Recarver, Vizant.

Технические особенности лампочек

Галогеновая лампочка Bosch Pure Light 1987301012 H7 12V 55W

Фирма Бош занимает лидирующее место среди надежных производителей. Эта модель входит в топ-10 благодаря интенсивному освещению дороги и объектов на большом расстоянии. Цветовая температура составляет – 3200 К. Обеспечивает качественное обозрение в условиях пониженной видимости, водитель может точно сфокусироваться и не потерять бдительность при аварийной ситуации.

Эффективно освещает близлежащие дорожные пути. Мощность составляет – 55 Вт, светит дневным белым светом, комфортным для зрения. Одни из лучших галогеновых ламп H7 на рынке с хорошим соотношением цена-качество.

Рекомендуется тем, кто ищет недорогую, долговечную лампочку белого свечения.

Отзывы

Владельцам нравится цена галогенки, яркий свет спектр освещения и светопередача. Обеспечивает хорошую видимость во время дождя и снега. Существенных минусов не выявлено.

Плюсы:

  • эффективное освещение;
  • белое свечение, близкое к дневному;
  • не ослепляет встречные автомобили;
  • соотношение цена-качество.

Минусы:

Лампы белого свечения Philips Diamond Vision 12972DVS2 H7 55W для линзованной оптики

В обзор лучших ламп H7 вошел галогеновый комплект со сроком работы в 400 часов, обеспечивающий интенсивную светопередачу. Равномерно и эффективно распределяют свет по главному дорожному полотну и соседним полосам. С их помощью водитель может объективно оценивать обстановку на дороге.

Цоколь PX26d отличается низкой температурой, защищен от перегревов, не подвергает плавлению пластик на фарах. Колба сделана из закаленного стекла, обладающего повышенной прочностью и стойкостью. Показатель светового потока – 950 лм, а температура – 5000 К, эти параметры обеспечивают приближение к дневному свету. Не слеплит встречных водителей, сохраняет обзор в плохую погоду.

Рекомендуется водителям, которые в поисках качественных, долговечных ламп с цоколем H7, обеспечивающих яркое освещение в условиях плохого обозрения.

Отзывы

Пользователям нравится оттенок свечения, равномерность и яркость светового пучка, подходят для линзованной оптики. Из недостатков отмечено, что свет отливает желтизной, срок работы около 9 месяцев.

Плюсы:

  • яркие;
  • с высоким световым показателем;
  • совместимы с фарами, имеющими линзу в конструкции;
  • равномерная яркость всего светового пучка;
  • подходят для непогоды.

Минусы:

  • отливают желтым оттенком.

General Electric Megalight Plus 58520MPU H7 12V 55W для противотуманных фар

Галогеновая лампочка для автомобиля светит ярче стандартного головного освещения. Дает хороший свет в дождливую погоду, рассеивает лучи по влажному асфальту на большое расстояние. Цветовая температура – 3500 К, напряжение и мощность – 12 В и 55 Вт. Эффективно освещают дорожное полотно ночью, с ними водитель чувствует себя в безопасности во время движения.

Не бликуют, не ослепляют встречных водителей. Лампы предназначены для противотуманок, а также для ближнего и дальнего света. Практически не нагреваются. В упаковке идет комплект из двух штук. Оптимальное соотношение стоимости и предложенных параметров.

Рекомендуется тем, кто ищет надежные, энергоэффективные лампочки для фар с правильным светораспределением и сбалансированной цветовой температурой.

Отзывы

Световые элементы нравятся за яркое освещение дороги и приятный глазу оттенок света. Существенных минусов не выявлено.

Плюсы:

  • мощные;
  • не подвержены перегерву;
  • хорошо показывают себя ночью;
  • подходят для использования в ПТФ;
  • универсальная цветовая температура;
  • не доставляют дискомфорта встречным водителям.

Минусы:

KOITO Whitebeam III H7 P0755W 4200K 12V 55W (100W) повышенной яркости

Японская фирма KOITO занимает лидирующее место среди производителей оптики и осветительных элементов для транспортных средств. Эта модель с повышенным уровнем яркости и способностью создавать видимость в тумане и при осадках. Мощность стандартная, составляет – 55 Вт, цветовая температура достигает – 4200 К, не подвержены перегревам.

Оттенок свечения – белый. Эффективно освещает дорогу и обочины, совместима со многими марками автомобилей. С точным фокусом светового потока и стабильной работой при высоких температурах. В упаковке комплект из двух штук.

Рекомендуется тем, кто хочет яркие лампы для авто с холодным белым свечением, надежные, простые в установке и эксплуатации.

Отзывы

Пользователям нравится стабильная работа, ближний свет светит лучше. Плюсом является интенсивность светового потока. Из минусов отмечена недолговечность.

Плюсы:

  • высокая цветовая температура;
  • термоустойчивость;
  • яркое освещение;
  • правильная геометрия светового пучка.

Минусы:

  • недолговечны.

Самая яркая светодиодная led-лампа Recarver Type F H7 7000 lm 6000K RECTFLED0H7-6-2canbus

Модель относится к осветительным элементам с высокой яркостью света. Значение светового потока составляет – 7000 лм при мощности 24 Вт. Способна светить на дальние расстояния с точным направлением пучка света. Оснащена защитой IP68, не подвергается воздействию влаги и других неблагоприятных факторов, выполнена из качественных материалов. Благодаря пластичному ленточному радиатору, износоустойчива и долговечна.

В конструкции есть обманка, которая убирает ошибки компьютера. Показатель цветовой температуры составляет 6000 К. Если выбираете, какие лампы H7 лучше светят в дождь, то обратите внимание на эту марку. Обеспечивает хороший обзор опасных участков, а также видимость в туман и снегопад. Помогают водителю лучше ориентироваться за рулем, а также избегать аварийных ситуаций, связанных с плохой видимостью.

Рекомендуется тем, кто ищет долговечные приборы для освещения дороги, отвечающие стандартам качества.

Отзывы

Владельцы довольны стабильной работой, яркостью и белым оттенком света. Из недостатков отмечают высокую цену.

Плюсы:

  • высокий показатель яркости;
  • устойчивость к вибрациям;
  • универсальная световая температура;
  • подходит для плохих погодных условий;
  • большой срок службы.

Минусы:

  • завышенная стоимость.

Ксеноновая Vizant 4H7 H7 4300K

Главное преимущество ксенона заключается в том, что такие световые элементы не подвержены перегоранию. Они не имеют нити накаливания, при этом светят ярко и продолжительно. По интенсивности света это самые мощные лампочки H7 в обзоре. При правильном использовании осветительные приборы прослужат более трех лет. Эта модель обладает правильной геометрией светового пучка с температурой в 4300 К.

Лампы не подвергаются вибрациям, ударам. Совместимы с большинством российских автомобилей (можно поставить в Приору). Показатель светового потока – 2800/3000 лм. Имеет теплый, белый свет, не ослепляющий встречных водителей. Экономно расходуют энергию, с хорошим сроком годности. Комплект состоит из двух штук.

Рекомендуется тем, кто ищет долговечные, яркие лампы, отличающиеся стабильностью, надежностью и равномерным свечением.

Отзывы

Автолюбители хвалят ксеноновые световые элементы за дальность светового потока, приятный глазу оттенок света, высокий уровень цветности. Существенных минусов не выявлено.

Плюсы:

  • одни из самых ярких;
  • высокая температура светового пучка;
  • не подвержены вибрациям;
  • экономичны;
  • хорошее соотношение цена-качество.

Минусы:

Заключение

Автомобильные лампы в цоколе H7 – наиболее распространенная модель среди автолюбителей. Они подходят для четырехфазной осветительной системы. Классические образцы галогенок более популярны и распространены. Они увеличивают зону освещения перед машиной, обладают повышенной яркостью при этом бюджетные. Заменить штатное освещение можно не только галогеновыми, но и ксеноновыми, а также светодиодными лампочками.

Перед тем, как приобрести определенную модель лампы Н7, необходимо точно понимать, в каких условиях она будет эксплуатироваться. Если предполагается часто использовать автомобиль в туман или снег, то выбирайте модели с температурой света 3000 кельвинов. Если требуется универсальное решение, то хорошо подойдут лампы с температурой 3500–4000 кельвинов.

Какую модель рейтинга ламп H7 выбрать, решает водитель, важно помнить, что именно правильный свет помогает быстро фокусироваться при плохой видимости. А также благодаря хорошему освещению можно вовремя избежать столкновения с пешеходом или встречным автомобилем.

В нашем рейтинге присутствуют световые элементы для фар ближнего и дальнего света от ведущих мировых производителей. Они отличаются качеством, долговечностью, обеспечивают обзор на дороге, эффективно освещают обочины, а также далеко расположенные объекты.

Лидерами топ-10 стали модели от лучших производителей автомобильных ламп:

Osram ULTRA LIFE 64210ULT-HCB 12V 55W. Модель от немецкой компании, выпускающей оптику для транспортных средств. Эта мощная галогеновая лампа не подвержена вибрациям, с продолжительным сроком службы.
Philips Vision Plus 12972VPS2 H7 55W – световой элемент от нидерландского производителя. Качественные, ярко освещают дорогу в непогоду.
Bosch Xenon Blue 1987301013 H7 12V 55W. Лампочки от немецкой фирмы, регулярно обновляющей линейку оптики, а также совершенствующей технологии. Ксеноновые лампы яркие, простые в установки, не слепят встречных водителей, долговечные.
Osram LEDriving HL 65210CW 14W 12/24V – светодиодные световые элементы, обеспечивающие четкую видимость, универсально подходят для линзованной оптики.

Для конкретной ситуации может оптимально подойти совсем другая модель ламп Н7, не представленная в списке лидеров нашего обзора. Все модели рейтинга отличаются высоким качеством и заслуживают внимания.

Лампы ближнего света H7 — описание, характеристики, разновидности

Головные фонари — обязательная часть любого автомобиля. От них во многом зависит безопасность движения. И по этой причине автомобильные концерны неустанно проводят исследования и работы по усовершенствованию этих ламп, работают над параметрами светового пучка, улучшают технические характеристики и надёжность. Проводя сравнительный тест, лаборатории определяют, какие лампочки самые лучшие.

Одним из самых распространённых видов автомобильных средств освещения являются лампочки H7 — они появились на рынке во второй половине 90-х годов.

Фары автомобиля с галогенными лампами

Лампочки H7 — описание и характеристики

Лампочки однонитевого типа H7 ставятся в четырёхфарные средства головного света в автомобиле с раздельной системой отражателей для дальнего и ближнего освещения. Но в подавляющем количестве случаев с помощью Н7 обеспечивается свет ближнего уровня. Для дальнего используется менее дорогая и устаревшая версия Н1.

У H7, что характерно для фланцевой разновидности, расстояние от фланца до спирали постоянно и фиксировано. Это делается с той целью, чтобы точка накала постоянно присутствовала в фокусе отражателей.

Испытательный тест показал, что это формирует правильный свет. Исходя из этого, можно акцентировать, что точность форм и размеров влияет на свет и является одним из факторов, определяющих качество ламп.

Лампа с цоколем H7 – общий вид

Сегодняшняя промышленность предлагает автолюбителям различные модификации ламп ближнего света H7. У них могут быть различными технология производства, параметры, характеризующие свет, и мощность. Для Н7 принята стандартная мощность 55 Вт. Но есть модификации Н7 с повышенными показателями мощности. Однако они рекомендованы лишь для использования во внедорожных условиях либо на закрытых треках. В обычном автомобиле применение таких ламп приведёт к тому, что система электрического питания будет перегружена и выйдет из строя.

Существуют следующие разновидности H7:

  • галогенные;
  • ксеноновые;
  • светодиодные.

Проведя тест и изучив отзывы, можно найти у каждой из разновидностей свои достоинства и недостатки. Давайте подробнее рассмотрим, какие особенности характерны для каждой модификации H7.

Галогенные лампочки H7

Галогенные источники ближнего освещения H7 имеют довольно невысокую стоимость. Для них не нужно устанавливать дополнительное оборудование. Они дают правильный качественный свет.

Они состоят из ёмкости, для изготовления которой берут твердосплавное или кварцевое стекло, нитки накаливания и газа с галогеновыми добавками. По сути, на сегодняшний день это наиболее широко используемый вариант ближнего освещения. Их самым весомым недостатком является то, что они светят при довольно высокой рабочей температуре, сильно влияющей на скорость изнашивания оптики. Если же говорить о балансе стоимости и качества, то у галогенных изделий H7 оно оптимальное.

Галогенная лампа Philips BlueVision Ultra SP H7

Ксеноновые лампочки Н7

В ксеноновых источниках ближнего освещения Н7 свет от электродуги пускают между двух электродов в стеклянной ёмкости с ксеноном. Это более современный вариант, гарантирующий правильный бело-голубой свет, комфортный для глаз водителя транспортного средства и не слепящий тех, кто сидит за рулём встречных машин. Поскольку они светят без нити накаливания, вибрация им не страшна — испытательный тест это подтверждает.

Ксеноновая лампа с цоколем H7

Однако ксеноновые лампочки имеют два существенных «минуса»:

  • Первый — это довольно высокая стоимость.
  • Второй – необходимость в установке дополнительного оборудования, ксеноновым изделиям нужен блок розжига.

Они распространены в гораздо меньшей степени, чем галогенки.

Светодиодные лампочки Н7

Эксперты, оценивающие качество и работу ламп, утверждают, что будущее автомобильных фонарей за светодиодами. Тест подтверждает перспективность этого направления. Они являются наиболее экономичными, отличаются долговечностью и стойкостью к вибрациям и ударам. Свет от этих ламп отвечает всем необходимым требованиям, именно поэтому лучшим вариантом для освещения будут светодиодные лампы H7.

Однако их использование предполагает применение специальной оптики. Некоторые ставят светодиоды в обычные фары. Однако это может вызвать проблемы. Светодиоды не светят точечно, поэтому обычные фары не дают возможности должным образом отрегулировать световой пучок.

Автомобильная светодиодная лампа STARLED 6G H7 CREE

Цена светодиодов довольно высокая. Поэтому они не очень широко распространены на рынке. Некоторые производители разработали конструкцию фар, где нет деления на лампочки, отражатель и оптику. Тест показал, что свет фары, состоящей полностью из светодиодных ламп, намного эффективнее справляется с обеспечением обзора дороги.

Выбор ламп ближнего освещения Н7

При выборе источников освещения Н7 у потребителей часто возникает вопрос, какие из них лучше. В этом вопросе правильнее всего учитывать факторы, которые для вас являются наиболее важными:

  • яркость их свечения;
  • комфорт освещения;
  • долговечность;
  • стоимость и другие показатели

Лучше не сильно гнаться за дешевизной, особенно если она достигается в ущерб качеству. От того, насколько качественно и правильно светят лампочки в ваших фарах, зависит ваша безопасность – уж на ней экономия обходится очень дорого.

Диаграмма силы света галогенных ламп головного света H7 в ближней зоне правой обочиныДиаграмма силы света галогенных ламп головного света H7 в дальней зоне правой обочины.

Разные производители используют свои методы и технологии изготовления ламп. Комплексный тест даёт оценку их качества и эффективности. Это позволяет избежать заведомо неверных путей в производстве. Однако тот же тест демонстрирует, что общие пути могут различаться в результате реализации у разных производителей.

Самым распространённым в этой сфере является совет учитывать репутацию производителя. Однако продукция малоизвестных фирм с неизвестной репутацией чаще всего уступает в качестве изделиям от известных брендов — они практически всегда светят, как надо.

При выборе необходимо знать, что, кроме стандартных изделий, изготовители предлагают варианты с улучшенными параметрами. Однако при этом стоит учесть, что, чем лучше один показатель, тем ниже другой — закон баланса никто не отменял.

Поэтому чем ярче светят источники освещения, тем короче срок их службы. И наоборот, у ламп с продлённым сроком службы свет обычно имеет меньшую яркость. Поэтому стандартные изделия, как правило — оптимальное решение в смысле баланса всех показателей.

Заключение

Лампочки Н7 на сегодняшний день чаще всего используются в фарах ближнего освещения автомобиля. Они светят практически во всех современных моделях. Промышленность предлагает сегодня их различные разновидности — выбор зависит от тех факторов, наиболее важных для конкретного потребителя.

Mazda 3 с галогенными лампами и светодиодной подсветкой

Широкий выбор и наличие модификаций с улучшенными характеристиками дают возможность оптимально обеспечить головное освещение вашего транспортного средства и тем самым позаботиться о своей безопасности.

[democracy]

[democracy]

Автор: Лагода Владислав Федорович

Образование высшее: среднее специальное. Специальность: Автомеханик. Хорошее знание устройства легковых автомобилей иностранного производства. Навыки работы: по замене ремня ГРМ ГБЦ ходовая часть сход-развал ТО. Ремонт…

Лучшие автомобильные лампы с цоколем H7

Содержание статьи

Лампы H7 – искусственные источники света, устанавливающиеся с целью освещения проезжей части и прилегающей территории в вечернее и ночное время, для улучшения видимости движущегося транспортного средства днём.

О цоколе H7

Цоколь H7 – конструктивная деталь, изготавливаемая из металла или керамики, внутри которой расположены элементы лампы (электроды, нити накаливания), а снаружи – контакты. Предназначен для выполнения следующих функций:

  1. Передачи электрического тока к нити накаливания (электроду).
  2. Надёжной фиксации автолампы в патроне.
  3. Герметизации колбы, предотвращения попадания внутрь пыли и влаги.

Последняя функция не актуальна для светодиодных автоламп, так как они не имеют как таковой колбы.

Лампы H7 устанавливаются в оптику головного света с раздельной системой отражателей и используются в качестве источника ближнего света. Различаются мощностью, цветовой температурой и другими техническими характеристиками.

Выбор между светодиодными, ксеноновыми и галогеновыми автолампами

Галогеновые

Галогеновые автолампы H7 наиболее доступны по стоимости. Имеют общее конструктивное сходство с обычными лампами накаливания. Заключены в герметичный корпус, защищающий внутренние элементы от внешних воздействий. В колбе — специальная газообразная смесь, которая увеличивает их срока службы и повышает яркость свечения.

Галогеновые автолампы неприхотливы в эксплуатации. Имеют простую конструкцию. Для их использования в транспортном средстве не требуется установка дополнительных элементов.

Главные недостатки – низкая эффективность освещения, относительно непродолжительный срок службы по сравнению с качественными светодиодными и ксеноновыми автолампами. Галогеновая лампа, в силу конструктивных особенностей, сильно нагревается во время эксплуатации и обладает повышенным энергопотреблением.

Ксеноновые

Главное достоинство ксеноновых автоламп в цоколе h7 заключается в повышенной светоотдаче, способствующей более качественному освещению дороги по сравнению с галогеновыми. Однако за яркий свет придётся расплачиваться дополнительными финансовыми затратами на установку блока розжига и других комплектующих. Правильно выбранный и грамотно установленный ксенон (биксенон) способен украсить и преобразить экстерьер автомобиля. Является популярным направлением тюнинга.

Светодиодные

Светодиодные лампы, если исключить малораспространённые на рынке светотехники и дорогостоящие лазерные диоды, являются наиболее современным видом автомобильной оптики. Отличаются сроком службы, минимальным потреблением электроэнергии и мощным световым потоком из-за большого количества источников (светодиодных элементов), находящихся в одной лампе.

Производители светотехнического оборудования выпускают большой ассортимент led автоламп с цоколем H7, поэтому владелец машины может подобрать оптимальный вариант по мощности, дизайну и стоимости. Светодиоды, как и ксеноновые лампы, способны преобразить внешний вид автомобиля, сделав переднюю часть более оригинальной и необычной.

Однако если в модели машины с завода поставляются галогеновые лампы H7, то для монтажа светодиодов придётся потратить большое количество времени и финансовых средств на установку дополнительного оборудования. При этом конечный результат может разочаровать покупателя. Из-за неправильного монтажа и подключения светодиодная оптика головного света слабо светит и сильно нагревается.

Лучшие галогеновые лампы H7

1. Philips Vision Plus

Эта модель автомобильной лампы изготовлена из специального кварцевого стекла, устойчивого к сверхвысоким температурам (до +800 градусов) и сохраняющего прочность на морозе. Стойко переносит воздействие ультрафиолетового излучения на протяжении длительного периода времени, не боится вибраций и попадания воды. Отличный вариант для установки, если автовладельцу требуется качественное освещение дороги с помощью галогеновой оптики.

+ Яркий свет.

+ Продолжительный период эксплуатации.

+ Надёжность работы.

+ Относительно привлекательная стоимость.

— Не выявлены.

2. Osram H7 Original

Галогеновые автолампы немецкой группы компаний Osram со штаб-квартирой в городе Мюнхене, специализирующейся на производстве осветительного оборудования. Имеют характеристику цветовой температуры в 3200K. Заявленный срок эксплуатации галогеновой лампы H7 Original составляет 250 часов, что является достаточно скромным показателем на фоне конкурентов.

+ Высокое качество изготовления.

+ Стабильность работы.

+ Оптимальная цветовая температура.

— Дорогая для галогеновых автоламп.

— Непродолжительное время работы.

3. Bosch Pure Light H7

Качественная светотехническая продукция гигантской группы компаний из Германии, реализующаяся на рынке под торговой маркой Bosch. Отличается надёжностью работы, а главное – демократичной стоимостью. Не имеет каких-либо уникальных технологий и конструктивных «фишек». Pure Light H7 – галогеновая автолампа, хорошо справляющаяся со своими задачами.

+ Цветовая температура – 3200K.

+ Доступная стоимость.

— Относительно малый срок эксплуатации.

Рейтинг ксеноновых ламп

1. MTF-Light H7

Неплохой вариант для тюнинга автомобиля. Выпускается южнокорейской компанией Jenn Feng Industrial, а продаётся на отечественном рынке под маркой MTF-Light. На выбор автовладельца доступно несколько вариантов цветовой температуры, включая наиболее популярный и распространённый 4300K. Корейский производитель выпускает и версию лампы 6000K (холодный белый с лёгким голубоватым оттенком).

+ Длительный срок эксплуатации.

+ Быстро нагревается до 80-процентной яркости.

— Завышенная стоимость.

2. Maxlux H7

Светотехническая продукция ещё одной южнокорейской компании, которая, правда, выпускается в Китае на производственных предприятиях, принадлежащих Sho-Me. Автомобильная ксеноновая лампа с цоколем H7 отличается высокой степенью яркости. Доступна в 3 версиях, отличающихся друг от друга цветовой температурой.

+ Высокая яркость.

+ Адекватная стоимость.

— Среднее качество изготовления.

3. Sho-Me H7

Sho-Me – южнокорейская компания, которая разрабатывает и производит автомобильное оборудование и аксессуары, включая светотехнические. Имеет большое количество заводов на территории Южной Кореи и Китая. Модель ксеноновой лампы Sho-Me H7 имеет качественную сборку и влагозащищённый цоколь, хорошо приспособленный к неблагоприятным условиям эксплуатации.

+ Продается по доступной цене.

+ Обладает устойчивостью к механическим нагрузкам.

+ Имеет неплохую светоотдачу.

+ Влагостойкость.

— Подходит не под все отражатели.

Лучшие светодиодные лампы H7 для автомобиля

1. ClearLight H7

Яркая и надёжная светодиодная оптика с заявленным сроком эксплуатации 30 тыс. часов. Отличается экономичным потреблением. Продаётся под торговой маркой ClearLight, принадлежащей международному концерну, часть производственных предприятий которого располагается в Германии, КНР и иных странах.

+ Небольшое потребление энергии.

+ Продолжительный срок эксплуатации.

+ Отлично освещает дорогу.

— Высокая стоимость.

2. DLED H7 9.5W

Led лампа российского производителя. Главное достоинство этой модели заключается в сверхэкономичности. В цветовой палитре доступно 2 варианта – тёплый и холодный белый.

+ Красивые и аккуратные.

+ Неплохое качество изготовления.

+ Минимальное энергопотребление при эксплуатации.

— Выполняют скорее декоративную функцию, так как общая яркость лампы составляет 990 лм.

Совет для правильного выбора

Существует огромное количество автоламп с цоколем H7. Чтобы не потеряться в большом количестве предложений российских и зарубежных производителей, определитесь с наиболее важными характеристиками и главными целями установки (ресурсом или высокой яркостью, качественным освещением или возможностью украсить переднюю часть автомобиля) и доступным бюджетом.

Видео: Тест ламп H7. Выбираем самую яркую

Обзор ламп h7 для ближнего света: Сравнение авто

На многих автомобилях для ближнего и дальнего света используются лампы h7. Данная маркировка указывает тип цоколя. Для машин характерны условия высокой тряски и вибрации, поэтому лампы для авто оснащаются специальным цоколем h7. По сравнению с другими, лампочки h7 имеют следующие преимущества:

  • их свет не ослепляет;
  • высокая яркость;
  • цоколь не сильно греется;
  • высокая светоотдача.

Разновидности автоламп h7

Лампочки h7 чаще всего устанавливают в ближний свет. В зависимости от источника освещения, лампы ближнего света h7 бывают нескольких видов:

  1. Галогенные.
  2. Светодиодные.
  3. Ксеноновые.
  4. С повышенной светоотдачей.
  5. С увеличенным сроком эксплуатации.
  6. Для любой погоды.
  7. С увеличенным количеством белого света.

Опишем каждый тип автоламп h7 более подробно.

Галогенные автолампы h7

Галогеновые лампы h7 выгодно отличаются простотой монтажа, низкой ценой и хорошими техническими характеристиками.

Наряду с указанными плюсами у галогеновых ламп есть и недостаток. При эксплуатации они нагреваются до высокой температуры. Галогенные лампы отличаются хорошим соотношением между ценой и качеством, что и является причиной их частого использования.

Галогеновая лампа устроена следующим образом: нить накаливания расположена в колбе, материалом которой служит твердосплавное или кварцевое стекло.

Автолампа h7 заполнена нейтральным газом и галогеновыми парами (йодом, бромом). Задача, которую ставят перед собой производители при проектировании новых моделей, — повышать соотношение между световым потоком и мощностью. Примером служит Plus 90 — лампа галогеновая с увеличенной светоотдачей. Лампы GE обладают не только повышенными световым потоком, но и освещают большую площадь дороги.

Увеличение яркости достигается двумя путями:

  • применение более тонкой нити накала;
  • увеличение потребляемой мощности.

Использование данных методов имеет и отрицательные стороны. В первом случае лампа галогеновая быстрее выйдет из строя, а во втором возрастет нагрузка на электропроводку автомобиля.

Светодиодные автолампы h7

На сегодняшний день они считаются одними из лучших. Данный факт обусловлен следующими их преимуществами:

  1. Низкая потребляемая мощность.
  2. Большой термин эксплуатации.
  3. Устойчивость к механическим вибрациям.

Например, вместо галогеновой лампочки h7 12V 55W можно использовать светодиодную на напряжение 7–32 V и мощностью 20 W, что значительно сэкономит расход электроэнергии. Осветительное устройство на основе диодов подходит и для ближнего света, и для дальнего.

Помимо положительных сторон, у светодиодных ламп h7 есть и недостаток — высокая стоимость. LED-лампы от галогеновых отличаются тем, что последние являются точечными источниками света. ЛЕД-лампочки состоят из цилиндра, на котором установлены светодиоды.

В результате световой поток по форме напоминает конус.

Если установка светодиодных ламп производится самостоятельно, то потребуется отрегулировать необходимую конфигурацию светового потока. При монтаже ламп в фары на автомобильном заводе они являются полностью функциональными. LED-лампы h7 применяются в машинах, оснащенных раздельной конструкцией ближнего и дальнего света.

Ксеноновые автолампы h7 и модифицированные автолампы h7

По сравнению с другими лампочками для автомобиля, ксеноновые имеют следующие особенности:

  • белый цвет с оттенком голубого, который не слепит встречных водителей;
  • большая сила света;
  • невосприимчивость к механическим вибрациям.

Ксеноновая автолампа h7 не лишена и минусов, а именно:

  1. Высокая цена.
  2. При монтаже требуется дополнительно устанавливать блок розжига.

Ксеноновая h7 лампа состоит из колбы, в которой находятся газы, и двух электродов. Автолампа h7 светит за счет электрической дуги, возникающей между электродами. Недостатки выступают причиной, по которой ксеноновая лампочка используется реже, чем галогенная.

Сегодня автомобилисты могут выбрать лампочки h7 с улучшенными техническими характеристиками.

Однако, выбирая модифицированные источники освещения, следует помнить, что улучшение одного параметра влечет за собой ухудшение другого.

Например, лампы повышенной яркости служат меньше, чем стандартные. А лампы h7 близкого света с увеличенным термином эксплуатации отличаются несколько сниженными техническими характеристиками.

Сравнение автоламп h7

Обзор ламп h7 может свестись к нескольким параметрам.

Лампочка h7 повышенной яркости. Указанное освещение достигается посредством изменения конструкции. За счет увеличения светового потока возрастает длина луча, что приводит к усиленной освещенности дороги.

Лампа н7 с увеличенным сроком эксплуатации. Такие модели особенно актуальны в тех странах, где использование ближнего освещения обязательно не только ночью, но и днем.

Автолампа h7 для любой погоды.

Она излучают белый цвет без синего оттенка. Вместо него применяется желтый свет, лучше проникающий через дождевую завесу или туман. Также благодаря его использованию появилась возможность повысить контрастность освещения. В результате увеличивается видимость машины для других участников дорожнего движения.

Автолампа h7 c увеличенным количеством белого света. По цвету они близки к ксеноновым. Такой оттенок лучше воспринимается водителем. Но в непогоду он плохо освещает дорогу, т. к. отражается от капель дождя, содержащихся в тумане. В результате перед водителем формируется белая «завеса».


Для того чтобы определить, какие лампочки ближнего света h7 самые лучшие, необходимо определиться с условиями эксплуатации и с приоритетом параметров. Как уже объяснялось выше, производители, увеличив, например, яркость, получают лампу с уменьшенным сроком службы.

Также можно учитывать рейтинг фирм-производителей лампочек h7 для ближнего света.

Среди стандартных галогеновых лучшими лампами h7 являются Philips. На следующей позиции расположены лампочки Mtf-Light Longlife Standart+30%. Рейтинг для галогеновых ламп h7 с увеличенным световым потоком показывает, что лидером тоже является Philips. Среди ксеноновых лучше всех светят Mtf-Light с колбой Philips. Лампа н7 Osram тоже находится в числе первых по светотехническим показателям. Ее устройство способствует хорошему распределению света на дороге. Она отличается высоким свечением: световой поток достигает 1500 люмен. При составлении рейтингов учитываются следующие факторы:

  1. Распределение освещения на дороге.
  2. Потребляемая мощность.
  3. Световой поток.
  4. Соответствие распределения света установленным стандартам.

Выбор автоламп h7 для ближнего освещения — дело ответственное, т. к. от этого зависит безопасность на дороге.

 

 

Быстрая изотермическая амплификация и портативная система обнаружения для SARS-CoV-2

Значимость

Важное ограничение существующих анализов для обнаружения SARS-CoV-2 связано с их зависимостью от трудоемких, трудоемких и лабораторных анализов. протоколы на основе вирусной изоляции, лизиса и удаления ингибирующих материалов. Хотя ОТ-ПЦР остается золотым стандартом для выполнения клинической диагностики для амплификации последовательностей РНК, существует острая потребность в альтернативных платформах для тестирования, которые были бы быстрыми, точными, простыми и портативными.Здесь мы демонстрируем изотермическое обнаружение SARS-CoV-2 на основе нуклеиновых кислот RT-LAMP с помощью аддитивно изготовленного картриджа и прибора на базе смартфона для тестирования, которое может быть выполнено в точке сбора образца.

Abstract

Пандемия COVID-19 является неотложным примером того, как существует разрыв между доступностью современной диагностики и текущими потребностями. Поскольку протоколы анализа и последовательности праймеров становятся широко известными, многие лаборатории проводят диагностические тесты с использованием таких методов, как ОТ-ПЦР или изотермическая амплификация, опосредованная обратной транскрипцией (RT-LAMP).Здесь мы сообщаем об изотермическом анализе RT-LAMP для обнаружения вируса тяжелого острого респираторного синдрома коронавируса 2 (SARS-CoV-2) и демонстрируем анализ клинических образцов с использованием простого и доступного инструмента для оказания медицинской помощи (POC). Мы охарактеризовали анализ путем погружения мазков в синтетическую назальную жидкость с добавлением вируса, перемещения мазка в вирусную транспортную среду (VTM) и взятия проб объема VTM для проведения анализа RT-LAMP без набора для экстракции РНК. Анализ имеет предел обнаружения (LOD) 50 копий РНК на мкл в растворе VTM в течение 30 мин.Мы также демонстрируем наш анализ, обнаруживая вирусы SARS-CoV-2 в 20 клинических образцах. Наконец, мы демонстрируем портативное устройство POC в реальном времени для обнаружения SARS-CoV-2 из образцов VTM с использованием трехмерного картриджа аддитивного производства и считывающего устройства на базе смартфона. Система POC была протестирована с использованием 10 клинических образцов и смогла обнаружить SARS-CoV-2 из этих клинических образцов, отличая положительные образцы от отрицательных через 30 минут. Тесты POC полностью согласуются с контролями ОТ-ПЦР.Эта работа демонстрирует альтернативный путь диагностики SARS-CoV-2, который не требует традиционной лабораторной инфраструктуры, в условиях, когда требуется диагностика в точке сбора образца.

С тех пор, как в декабре 2019 года коронавирус тяжелого острого респираторного синдрома 2 (SARS-CoV-2) перешел из резервуара животных в людей, острое респираторное заболевание под названием COVID-19 быстро распространилось по всему миру, принося смерть, болезни и нарушения повседневной жизни. жизни и экономических потерь для юридических и физических лиц (1⇓ – 3).Быстрое развитие пандемии COVID-19 подчеркивает недостатки существующей парадигмы лабораторного тестирования для вирусной диагностики (4). Фундаментальные ограничения современных диагностических тестов для вирусных патогенов проистекают из их зависимости от анализа ПЦР, который требует циклического изменения температуры, а также трудоемких лабораторных протоколов для выделения вирусов, лизиса и удаления ингибирующих материалов. Хотя недавно метод RT-qPCR продемонстрировал обнаружение SARS-CoV-2, минуя необходимость выделения / очистки РНК, начиная с образца слюны (5), метод PCR нелегко адаптировать для обнаружения в точке использования. , из-за необходимости изменения температуры.Хотя ПЦР остается проверенным золотым стандартом клинической диагностики, существует острая необходимость в других подходах, которые достаточно дешевы и быстры, чтобы поставить диагноз на месте использования.

В дополнение к тесту RT-PCR SARS-CoV-2 Центров по контролю и профилактике заболеваний (CDC) (6), стали доступны другие диагностические тесты, в том числе тест Cepheid Xpert Xpress SARS-CoV-2 (7), тест Abbott ID NOW COVID-19 (8), диагностический тест Color SARS-CoV-2 изотермической амплификации (LAMP) (9) и другие (10–20).Тест Cepheid SARS-CoV-2 может дать положительные и отрицательные результаты для обнаружения SARS-CoV-2 через ∼30 и 45 минут соответственно (21). Однако для этого теста требуется система GeneXpert, которой в США доступно только 5000 систем (22). Тест также требует выделения РНК в качестве отдельного этапа от амплификации и обнаружения, что является ограничением масштабируемости и может ограничивать доступность по мере увеличения спроса на критически важные запасы (23). Технология изотермической амплификации Abbott ID NOW утверждает, что дает положительные результаты менее чем за 15 минут, предлагая при этом устройство портативных размеров и веса.Однако для этого теста также требуется специализированный прибор с хорошо задокументированными проблемами доступности (24⇓ – 26). Также могут быть проблемы с точностью этого теста, хотя утверждения о точности остаются на рассмотрении (27). Другой изотермической технологией с хорошими характеристиками является диагностический анализ SARS-CoV-2 LAMP от Color Genomics с пределом обнаружения (LOD) около 0,75 копий вирусной РНК на микролитр 100% положительное и отрицательное согласие для 543 образцов пациентов (9) . Анализ также интересен своим колориметрическим считыванием, которое может позволить использовать новые приложения и форм-факторы.Однако подготовка образца включает этап экстракции РНК на основе гранул, который может увеличить стоимость и время, необходимые для проведения анализа.

Диагностика, основанная на амплификации LAMP, является убедительной альтернативой ПЦР, поскольку LAMP может выполняться без использования коммерческих термоциклеров, что сокращает время получения результата (28). Очень важно, что простота изотермической амплификации и отсутствие отдельных этапов вирусной экстракции позволяют преобразовать его в простое устройство для использования в месте использования на основе одноразовых картриджей (29).Кроме того, RT-LAMP имеет преимущества перед RT-PCR для нацеливания последовательностей благодаря своей устойчивости к ингибиторам (30, 31), а также своей высокой специфичности, используя от четырех до шести праймеров, которые идентифицируют от шести до восьми областей на матрице для амплификации. (28).

В этой статье демонстрируется обнаружение с помощью RT-LAMP POC SARS-CoV-2 с помощью простой и портативной диагностической системы, основанной на аддитивно изготовленном трехмерном (3D) картридже и оптическом считывателе на базе смартфона. Мы демонстрируем диагностическую систему на месте (POC), обнаруживая SARS-CoV-2 в 10 клинических образцах вирусной транспортной среды (VTM) без использования какого-либо другого внешнего оборудования для смешивания образца / реагента, амплификации или считывания.Мы также представляем подробную характеристику разработки анализа с использованием VTM, синтетических назальных растворов с добавками и анализа клинических образцов VTM от пациентов.

Результаты

POC Системный подход.

Полный рабочий процесс от сбора образца до анализа с помощью нашего портативного устройства показан на рис. 1 A . Сначала образец берется у пациента с помощью мазка из носоглотки (NP). Затем тампон переносят в раствор VTM и осторожно встряхивают для переноса вирусов из тампона в VTM.В-третьих, мазок выбрасывается, а аликвоты из VTM подвергаются термическому лизированию (95 ° C, 1 мин). Затем лизированный образец и реагенты RT-LAMP загружаются в шприцы объемом 1 и 5 мл соответственно, затем шприцы присоединяются к микрожидкостному картриджу, и лизированный образец и реагенты RT-LAMP одновременно вводятся в картридж. Наконец, картридж помещается в портативную подставку для смартфона, и амплификация нуклеиновой кислоты с помощью интеркалирующего флуоресцентного красителя происходит при 65 ° C.Мониторинг в реальном времени флуоресцентного излучения, генерируемого во время амплификации, выполняется с помощью камеры смартфона, а анализ изображений позволяет определить время, в которое произошло усиление.

Рис. 1.

Проверка трех наборов праймеров LAMP для четырех различных генных мишеней SARS-CoV-2. ( A ) Рабочий процесс для обнаружения SARS-CoV-2 с помощью нашего портативного устройства POC. ( B ) Схема генома SARS-CoV-2 и четыре гена-мишени для дизайна праймеров. ( C ) Сравнение времени порога положительной амплификации для четырех генов (500 копий на мкл, n = 3) с использованием набора праймеров 3 для гена Orf 1a, набора праймеров 2 для гена S, набора праймеров 2 для гена Orf 8, и набор праймеров 1 для гена N.( D ) Времена порога амплификации ( n = 3) для обнаружения различных концентраций геномной РНК с использованием набора праймеров 3 для гена Orf 1a, набора праймеров 2 для гена S, набора праймеров 2 для гена Orf 8 и набора праймеров 1 для гена N. Наилучший предел обнаружения составил 50 копий на мкл, достигнутый с использованием набора праймеров для гена N. Столбчатые диаграммы показывают среднее значение и стандартное отклонение.

Дизайн праймера и характеристика анализа с использованием геномной РНК SARS-CoV-2.

Чтобы разработать чувствительный и специфический анализ RT-LAMP для обнаружения SARS-CoV-2, мы разработали специфичные для последовательности праймеры для четырех генов из вирусного генома SARS-CoV-2.Используя базовый инструмент поиска локального выравнивания для анализа нуклеотидов (BLASTn), мы идентифицировали гены Orf 1a, S, Orf 8 и N для дизайна праймеров, которые кодируют полипротеин Orf1ab, поверхностный гликопротеин, белок Orf 8 и фосфопротеин нуклеокапсида, соответственно ( Рис.1 B ). Целевые регионы Orf 1ab, S и Orf 8 были выбраны потому, что они показали наименьшее сходство с другими последовательностями коронавируса, такими как SARS-CoV-1 и Ближневосточный респираторный синдром-CoV (32). Целевая область N гена была выбрана из-за ее перекрытия с областью, используемой для дизайна праймеров в тестах COVID-19, одобренных в настоящее время CDC и Управлением по контролю за продуктами и лекарствами (33).Три набора праймеров для каждого из четырех выбранных генов были созданы с использованием Primerexplorerv4 (https://primerexplorer.jp/e/), а эксперименты с RT-LAMP с использованием геномной РНК SARS-CoV-2 были выполнены в стандартном термоциклере при фиксированной температуре. . На рис.1 C показаны пороговые времена для обнаружения геномной РНК SARS-CoV-2 (500 копий на мкл) с использованием наборов праймеров для гена Orf 1a, гена S, гена Orf 8 и гена N. Кривые амплификации (необработанные данные) можно найти в приложении SI , рис.S1. Наилучший набор праймеров для каждого гена (набор праймеров 3 для гена Orf 1a, набор праймеров 2 для гена S, набор праймеров 2 для гена Orf 8 и набор праймеров 1 для гена N) был выбран на основе наименьшего порогового времени и использован для LOD. анализ. Все протестированные последовательности праймеров показаны в приложении SI, таблица S1.

Затем мы сравнили LOD четырех выбранных наборов праймеров путем амплификации серийных разведений РНК SARS-CoV-2 (рис. 1 D ). LOD для РНК с использованием набора праймеров для гена Orf 1a составлял 500 копий на мкл, причем только 2/3 повтора давали амплификацию для 50 копий на мкл РНК SARS-CoV-2.Предел обнаружения для праймеров гена S и гена Orf 8 составлял 5000 копий на мкл РНК, поскольку не все реплики амплифицировались до 500 копий на мкл образца. Реакции, проведенные с праймерами гена N, продемонстрировали самый низкий LOD и самое быстрое время амплификации, при амплификации 50 копий на мкл в течение 25 минут после начала реакции. Кривые усиления (необработанные данные) можно найти в приложении SI , рис. S2. Основываясь на этих результатах, мы выбрали набор праймеров 1, нацеленный на ген N, в качестве последнего набора праймеров для нашего анализа RT-LAMP для обнаружения SARS-CoV-2.

Определение характеристик анализа с использованием инактивированных вирусов SARS-CoV-2 и моделирования клинического рабочего процесса.

Для диагностического тестирования SARS-CoV-2 текущий клинический рабочий процесс включает в себя сбор образцов NP / носа с помощью тампонов, которые немедленно переносятся в стерильную транспортную пробирку, содержащую от 2 до 3 мл VTM, для хранения до тех пор, пока диагностические тесты не смогут выполняться (34). Чтобы оценить эффективность нашего детекционного анализа в текущем клиническом рабочем процессе, был разработан протокол с моделированием образцов НП / мазков из носа, как показано на рис.2 А .

Рис. 2.

Обнаружение вируса SARS-CoV-2 в образцах ложных мазков NP, доставленных в VTM. ( A ) Схема процесса обнаружения вирусов с помощью имитационного тампона NP. Тампон вставляется в трубку с носовой жидкостью, содержащей вирус, и абсорбирует жидкость. После энергичного перемешивания тампона с 100 мкл или 500 мкл VTM аликвоту образца VTM подвергают термическому лизису при 95 ° C в течение 1 мин. Реагенты RT-LAMP добавляют к лизированному вирусному образцу, и реакцию проводят при 65 ° C в течение 60 минут.( B ) Пороговое время амплификации ( n = 3) для обнаружения вирусов в реакции объемом 16 мкл с образцом VTM 12,5% и 50% на реакцию из образца VTM объемом 500 мкл.

Перед тестированием этого протокола были охарактеризованы эффекты термического лизиса для обнаружения инактивированного SARS-CoV-2 в назальной жидкости и в VTM. Эти результаты суммированы в приложении SI , рис. S3 – S6. Затем, чтобы оценить наш анализ в текущем клиническом рабочем процессе, коммерческие тампоны (Puritan стерильные аппликаторы с наконечником из полиэстера, 25-800D 50) были введены в приобретенный назальный раствор с добавлением известных концентраций вируса.Мазок переносили в ВТМ и осторожно перемешивали в растворе для переноса вирусов из тампона в ВТМ. После этого мазок отбрасывали и отбирали аликвоты из VTM для проведения термического лизиса при 95 ° C в течение 1 мин. Наконец, добавляли реагенты RT-LAMP, и последнюю реакцию проводили при 65 ° C в течение 60 минут. Мы перенесли имитацию мазков в 100 и 500 мкл VTM, чтобы оценить влияние объема VTM на эффективность переноса вирусной нагрузки мазка. Для каждого условия выше мы выполнили тесты LOD с 12.5% и 50% VTM на реакцию. Результаты, полученные с использованием 500 мкл VTM, можно увидеть на рис. 2 B (необработанные кривые амплификации можно найти в приложении SI , рис. S7). Результаты, полученные с использованием 100 мкл VTM, можно найти в приложении SI , рис. S8.

Для 100 мкл VTM LOD оставалось 2,5E4 копий на мкл вируса в исходной носовой жидкости как для 12,5%, так и для 50% VTM в реакции, даже несмотря на то, что реакции 50% VTM демонстрировали отложенные амплификации. Вышеупомянутый предел обнаружения в назальной жидкости составляет 5E3 копий на мкл вируса в VTM после переноса мазка.Это на два порядка больше, чем 50 копий на 1 мкл предела обнаружения вирусов, непосредственно добавленных в VTM, и указывает на неэффективный перенос вируса из тампона в 100 мкл раствора VTM, который присутствует во всех процессах сбора образцов на основе мазков. Эта неэффективность, вероятно, возникает из-за неадекватной адсорбции вирусов тампоном и последующего неадекватного высвобождения вирусов в VTM. Низкая площадь межфазного контакта между тампоном и VTM из-за объема VTM также может играть роль в плохом высвобождении вирусов в VTM.

Для 500 мкл VTM с 12,5% и 50% VTM в реакции LOD улучшился до 250 копий на мкл и 2,5E3 копий на мкл вируса в назальной жидкости, соответственно. Вышеуказанные пределы обнаружения в назальной жидкости составляют 10 копий на мкл и 100 копий на мкл вируса в VTM после переноса мазка, что сопоставимо с контрольными экспериментами, в которых вирусы были непосредственно введены в VTM. Это указывает на эффективное высвобождение вируса в 500 мкл VTM с эффективностью переноса, близкой к 100%. Для каждого условия были выполнены три повтора мазка.

Разработка анализа для обнаружения SARS-CoV-2 в образцах пациентов.

Мы также охарактеризовали нашу реакцию RT-LAMP с использованием 20 клинических образцов (10 известных положительных и 10 известных отрицательных), полученных от OSF Healthcare, Пеория, Иллинойс, через утвержденный институциональный наблюдательный совет (OSF Peoria IRB # 1602513 через Колледж Университета Иллинойса). медицины с отказом от согласия). Полученные образцы отбраковывались перед стадией очистки РНК. Наряду с образцами мы также получили результаты тестов ОТ-ПЦР, проведенных OSF Healthcare.Фиг. 3 A показывает блок-схему процесса обнаружения вирусов в клинических образцах VTM (анализ RT-LAMP и контроль RT-PCR). Образцы были собраны в соответствии с клиническими методами золотого стандарта (с использованием тампона NP) и заморожены.

Рис. 3.

Обнаружение вируса SARS-CoV-2 в клинических образцах VTM. ( A ) Процесс обнаружения вирусов в клинических образцах VTM. Образец берется у пациента с помощью тампона NP. После того, как образец перенесен в VTM (шаг 2), выполняется тест RT-PCR, и результаты используются в качестве контроля.Выброшенный VTM замораживается для передачи и хранения. После оттаивания аликвоты подвергаются термическому лизированию (стадия 3b) перед проведением RT-LAMP (65 ° C, 60 мин). Путь RT-LAMP не требует выделения РНК. ( B D ) Оценка клинических образцов ( n = 4). Образцы VTM от 10 SARS-CoV-2-позитивных и 10 SARS-CoV-2-негативных пациентов (по оценке контрольного теста RT-PCR с экстракцией РНК) были проанализированы с использованием разработанного анализа RT-LAMP. ( B ) Неопределенные значения Ct нанесены на 1.( C и D ) Необработанные данные флуоресценции ( n = 4) для обнаружения SARS-CoV-2 в клинических образцах VTM.

Все 10 образцов, идентифицированных как положительные с помощью ОТ-ПЦР, и все 10 образцов, идентифицированных как отрицательные с помощью ОТ-ПЦР, также были положительными и отрицательными с помощью нашего анализа RT-LAMP (рис. 3 B ). Таким образом, чувствительность и специфичность нашего анализа на SARS-CoV-2 составила 100%, с ложноотрицательными и ложноположительными показателями 0%. Кривые усиления (необработанные данные) представлены на рис.3 C и D . Таблица, показывающая пороговое время (анализ RT-LAMP) и значения Ct (контроль), показаны в приложении SI , таблица S2.

Обнаружение SARS-CoV-2 в образцах пациентов с помощью портативного ридера и картриджей аддитивного производства.

Наконец, мы демонстрируем обнаружение вирусов SARS-CoV-2 в клинических образцах с использованием образцов VTM от пациентов (OSF Healthcare) и с помощью нашего портативного портативного считывателя. В этих испытаниях образцы загружались вручную без использования насосов.Портативный портативный считыватель включал в себя нагревательные элементы и оптику, необходимые для выполнения и регистрации реакции. На рис. 4 A C показаны схематическая диаграмма, фотография и механические чертежи диагностического микрожидкостного картриджа (верхняя и нижняя плоскости змеевидных каналов смешения), используемого для быстрого обнаружения SARS-CoV-2 в VTM. Области амплификации и диагностики включают шесть камер амплификации в форме пирога. Картридж имел трехмерные змеевидные микрофлюидные каналы для смешивания вирусов в образце VTM с реагентами для амплификации.После перемешивания конечная реакционная смесь поступает в резервуары для амплификации. Резервуары были специально разработаны для обеспечения равномерного заполнения всех камер, как это показано в Movie S1. После того, как камеры амплификации были полностью загружены, они были запечатаны биосовместимым клеем, и картридж был вставлен в ридер для окончательной реакции. Встроенный нагреватель был установлен на 65 ° C, и для получения изображений использовался смартфон. На рис. 4 D показано оптическое изображение считывающего устройства со вставленным картриджем.Реагенты RT-LAMP и образец VTM с добавлением вируса загружали с помощью шприцев через входные отверстия, совместимые с люэровским замком. На рис. 4 E показана схема портативного прибора POC, показывающая компоненты в разобранном виде с подробным описанием компонентов считывающего устройства. Пока смартфон отображает картридж, изотермический нагрев и освещение работают от батареи. Светодиоды и фильтры излучения были выбраны в соответствии с длинами волн возбуждения и излучения интеркалирующего флуоресцентного красителя.

Фиг.4. Микрожидкостный картридж

аддитивного производства и портативный POC-прибор. ( A ) Схема микрожидкостного диагностического картриджа, используемого для быстрого обнаружения SARS-CoV-2 в VTM. Входные отверстия для жидкости соединяются со шприцами, которые вводят либо реагенты RT-LAMP, либо термически лизированный образец пациента в трехмерную змеевидную область смешивания перед заполнением области амплификации и диагностики. ( B ) Фотографии одноразового микрожидкостного картриджа. ( C ) 3D-сканирование микрожидкостного картриджа и увеличенное изображение пулов обнаружения в области амплификации и диагностики картриджа.( D ) Фотография прибора, используемого для быстрого обнаружения. ( E ) Схема портативного прибора POC, показывающая компоненты в разобранном виде. Смартфон отображает картридж, а изотермический нагрев и освещение работают от батареи. Оптические компоненты, встроенные в прибор, соответствуют характеристикам возбуждения и излучения флуоресцентного сигнала.

Перед тестированием клинических образцов была проведена первоначальная оценка платформы путем добавления инактивированного SARS-CoV-2 (5000 копий на мкл) и отрицательного контроля (0 копий на мкл) в VTM.Флуоресцентные изображения с вычетом из базовой линии в реальном времени амплификации на картридже для 5000 копий на мкл вируса в VTM и отрицательном контроле (только VTM) показаны в приложении SI , рис. S9. Аналогичным образом, Movie S1 также показывает видео с временной меткой амплификации на картридже для 5000 копий на мкл вируса в VTM и отрицательном контроле (только VTM). Используя этот образец с добавлением, положительный результат был поглощен всего за 30 минут от начала реакции.

Из клинических образцов VTM, протестированных без картриджа, пять положительных и пять отрицательных образцов были отобраны для характеристики нашего устройства.Критерии отбора для этих пяти положительных образцов были основаны на значениях C t , полученных от клинических контролей на основе ОТ-ПЦР. Хотя некоторые клинические образцы VTM имели значения C t в диапазоне от 11 t <20, мы выбрали пять положительных образцов со значениями C t в диапазоне от 20 до 30, поскольку в некоторых исследованиях сообщалось о клинических образцах. Значения Ct в этом диапазоне. Например, сообщалось о значениях C t для 17 пациентов с симптомами в зависимости от дня появления каких-либо симптомов (35).В этой работе сообщалось о значениях C t в диапазоне от 20 до 30 в течение первых 12 дней после появления симптомов (мазки из носа). Аналогичным образом, это исследование включало анализ одного пациента без зарегистрированных клинических симптомов. В этом случае бессимптомный пациент дал положительный результат на 7, 10 и 11 дни после контакта с другим подтвержденным пациентом, инфицированным SARS-CoV-2 (значения C t : от 22 до 28, мазок из носа). В другом примере были протестированы 16 пациентов с SARS-CoV-2 в критическом состоянии, и значения медианы и третьего квартиля C t находились в диапазоне от 20 до 30 (по мазку из носа) (36).

На рис. 5 показана оценка 10 клинических образцов с использованием нашей системы POC на основе RT-LAMP, которая демонстрирует полное соответствие с измерениями RT-PCR. Наша платформа предоставляла изображения с усилением флуоресценции в реальном времени без необходимости в каком-либо другом внешнем оборудовании. Для анализа каждого клинического образца использовали один микрофлюидный картридж. Аналогичным образом, каждый тест включал анализ шести подвыборок (шесть камер амплификации в форме пирога). Изображения флуоресценции были проанализированы с использованием программного обеспечения Image J, и интенсивность флуоресценции каждой реплики была построена как функция времени (рис.5 А ). Тесты t были выполнены, чтобы продемонстрировать, что интенсивность флуоресценции положительных образцов статистически значима по сравнению с отрицательными образцами (рис. 5 B ). Кривые рабочих характеристик приемника (ROC) были построены для сравнения положительных образцов с отрицательными образцами для каждой временной точки (рис. 5 C ). AUC для 40 и 30 минут составляла 1,00 в обоих случаях, показывая, что наша система может правильно отличать положительные образцы от отрицательных через 30 минут.На рис. 5 D показаны изображения с усилением, полученные для всех образцов, испытанных в конечной точке обнаружения (40 мин). Изображения с усилением в реальном времени можно увидеть в приложении SI , рис. S10.

Рис. 5.

Быстрое обнаружение SARS-CoV-2 в клинических образцах VTM с использованием микрожидкостного картриджа аддитивного производства и портативного прибора POC. ( A ) Интенсивности флуоресценции RT-LAMP в реальном времени на аддитивно изготовленном чипе амплификации в различные моменты времени.Разработанное устройство позволяет четко отличить все положительные образцы от отрицательных всего за 30 мин ( n = 6). ( B ) Тест t показывает, что интенсивность флуоресценции положительных образцов (P) статистически значима по сравнению с отрицательными образцами ( N ). ( C ) Кривые ROC проанализированы для четырех временных условий. Для каждого момента времени положительные образцы анализировали против отрицательных образцов. ( D ) Флуоресцентные изображения анализа RT-LAMP SARS-CoV-2 в реальном времени в конечной точке обнаружения на аддитивно изготовленном чипе амплификации.

Обсуждение

Текущий золотой стандарт для обнаружения вируса SARS-CoV-2 в мазках с NP основан на ОТ-ПЦР, которая также требует лабораторных протоколов для выделения и концентрации вируса. Большинство коммерчески доступных диагностических тестов COVID-19 в США, Европе и Азии представляют собой настольные системы, предназначенные для использования в лабораториях и не адаптированные для портативных и удобных приложений (37). Хотя текущая лабораторная парадигма SARS-CoV-2 является масштабируемой и может быть автоматизирована для обеспечения высокой пропускной способности, существует острая потребность в альтернативах, расширяющих возможности тестирования в POC и в условиях ограниченных ресурсов.Хотя ресурсы для тестирования доступны в некоторых густонаселенных и богатых регионах, в некоторых регионах нет легкого доступа к лабораторным тестам, которые требуют специального оборудования, инфраструктуры и опыта. Чтобы расширить этот доступ, необходимы быстрые, портативные и недорогие технологии, которые также могут обеспечивать пределы обнаружения, сопоставимые с лабораторными методами.

В этой статье мы демонстрируем быстрое (<40 минут) обнаружение вируса непосредственно из тампонов NP-носителей вирусной среды с использованием портативного ручного считывателя и картриджей аддитивного производства.Это устройство POC использует изотермический анализ RT-LAMP для быстрого и экономичного обнаружения SARS-CoV-2. Используя клинические образцы, наличие вируса было исследовано в 10 клинических образцах (пять подтвержденных положительных и пять подтвержденных отрицательных). Наша система может отличать положительные образцы от отрицательных после 30 минут реакции на картридже, демонстрируя полное соответствие с измерениями ОТ-ПЦР того же образца. Ключевым этапом, упрощающим анализ, является термический лизис, который эффективно разрушает вирусы, высвобождая РНК для амплификации, а также инактивирует нуклеазы, присутствующие в неочищенных образцах (38).Термический лизис имеет преимущества перед обработкой образцов на основе растворов, которые разбавляют образец и могут привести к снижению чувствительности. Этот полностью переносимый подход позволяет быстро обнаружить вирус, устраняя при этом необходимость в наборе для экстракции РНК и соответствующем оборудовании. Такой подход может позволить масштабируемое развертывание диагностики COVID-19 без инфраструктуры и ресурсов лабораторного уровня, особенно в условиях, когда диагностика требуется в точке сбора, например в школах, учреждениях по уходу за престарелыми или инвалидами или на спортивных мероприятиях.

Инструмент POC разработан с учетом низкой стоимости, доступности и возможности масштабирования. Поскольку весь анализ может быть проведен внутри картриджа, принцип работы очень прост и может быть выполнен с минимальным обучением. Инструмент был сконструирован из имеющихся в продаже компонентов и корпуса, который легко можно было изготовить на бытовом 3D-принтере. Оптическое обнаружение можно выполнить практически с любого современного смартфона. Одноразовый картридж, который обычно представляет собой серьезные технические проблемы при масштабировании производства, был изготовлен с использованием высокоскоростного промышленного оборудования для аддитивного производства и не требует дополнительных масштабных работ с использованием этих методов.

Несмотря на то, что в последнее время появились сообщения об основанных на RT-LAMP анализах для обнаружения SARS-CoV-2 (39, 40), насколько нам известно, ни одно предыдущее исследование не показало обнаружение SARS-CoV-2 с помощью портативного компьютера. портативный инструмент со встроенным одноразовым картриджем без извлечения РНК. Другие соответствующие технологии, такие как анализ от Color Genomics, сообщают о высокой пропускной способности с низким уровнем детализации (0,75 копий на мкл), но требуют стадии экстракции РНК на основе гранул (9). Аналогичным образом, в недавней статье сообщалось о разработке анализа RT-LAMP / Cas12 для обнаружения SARS-CoV-2 с LOD = 10 копий на мкл, но также требует экстракции РНК (41).

На столе (вне картриджа) наш анализ, протестированный на 20 образцах пациентов, имел 100% точность. Как показано на рис. 3 B D , чувствительность [определяемая как истинные положительные результаты / (истинные положительные результаты + ложно отрицательные) и специфичность (определяемая как истинные отрицательные результаты / (истинные отрицательные результаты + ложные положительные результаты))] нашего настольного анализа составляли 100% в протестированных образцах Все 10 образцов, идентифицированных как положительные с помощью ОТ-ПЦР, и все 10 образцов, идентифицированных как отрицательные с помощью ОТ-ПЦР, также были положительными и отрицательными, соответственно, с помощью нашего анализа.20 образцов были проанализированы в четырех повторностях по 2 мкл каждый, что показало высокую воспроизводимость. Анализ RT-LAMP позволяет обойтись без выделения / очистки РНК, что снижает общую стоимость и время анализа. Однако пропуск стадии экстракции и концентрирования РНК вместе с небольшим объемом образца (2 мкл), используемым в каждой реакции, может объяснить результаты, полученные в образце 9, где одна реплика не амплифицировалась, а другая реплика амплифицировалась позже. В будущем использование большего объема анализа может устранить проблемы с отбором проб и повысить чувствительность.

Анализ POC продемонстрировал 50 копий на мкл LOD с геномной РНК и неактивными целыми вирусами в буфере, а также отсутствие потери чувствительности в VTM. Опубликованные отчеты об изучении вирусной нагрузки SARS-CoV-2 в клинических образцах предполагают, что этот LOD соответствует клиническим потребностям. Например, в исследовании, проведенном на 3303 пациентах с положительным результатом на SARS-CoV-2, вирусная нагрузка находилась в диапазоне от 1 копии на мкл до 10 8 копий на мкл, при этом большинство образцов находились в диапазоне от 10 4 до 10 8 копий на мкл (42).В другом исследовании с участием 1145 госпитализированных пациентов с SARS-CoV-2 (средний возраст 64,6 года) средняя вирусная нагрузка составила 1440 вирусных копий на мкл (43). Эти вирусные нагрузки можно легко измерить с помощью нашего устройства POC.

Наконец, в последнее время появились сообщения об использовании слюны в качестве альтернативы процессу сбора мазков NP. Эти отчеты продемонстрировали возможность прямого обнаружения SARS-CoV-2 в образцах слюны пациентов с использованием ОТ-ПЦР (5) и ОТ-LAMP (40) без этапов очистки РНК с использованием большего объема образца (> 60 мкл).Многообещающие результаты настоящего исследования, вероятно, могут быть расширены для использования с образцами слюны для неинвазивного, портативного, быстрого и масштабируемого тестирования на COVID-19.

Материалы и методы

Геномная РНК и вирусы SARS-CoV-2.

Геномная РНК для коронавируса 2, связанного с SARS (Isolate USA-WA1 / 2020), NR-52285, была получена из ресурсов BEI. Эти флаконы с геномной РНК хранили при -80 ° C, а исходные объемы либо использовали непосредственно для экспериментов, либо разбавляли до нужной концентрации в буфере TE.Для экспериментов с использованием вируса тепловой инактивированный коронавирус 2, связанный с SARS, NR-52286 был получен через BEI Resources. Эти запасы разделяли на аликвоты и хранили при -80 ° C. Исходные объемы либо использовали для прямых экспериментов, либо разбавляли в буфере TE или среде для транспортировки вирусов до нужных концентраций.

Последовательности праймеров и реакции валидации праймеров.

Последовательности праймеров для реакций RT-LAMP были синтезированы Integrated DNA Technologies и перечислены в SI, приложение , таблица S1.Primerexplorerv4 (https://primerexplorer.jp/e/) был использован для создания всех наборов праймеров RT-LAMP для РНК и вируса SARS-CoV-2. Последовательность вируса SARS-CoV-2 была получена из базы данных Национального центра биотехнологической информации (номер GenBank MN988713.1).

Всего было протестировано 12 наборов праймеров (по три набора праймеров для четырех разных генных мишеней) с геномной РНК SARS-CoV-2 в качестве матрицы, чтобы определить лучший набор праймеров для каждого гена, который обнаружил 500 копий РНК на мкл с наименьшим пороговым временем.Были выбраны набор праймеров 3 для гена Orf1a, набор праймеров 2 для гена S, набор праймеров 2 для гена Orf 8 и набор праймеров 1 для гена N. После этого были проведены анализы RT-LAMP с четырьмя выбранными наборами праймеров на 10-кратно серийно разведенной РНК для определения диапазона обнаружения. Набор праймеров для нацеливания на ген N (набор праймеров 1) показал обнаружение 50 геномных копий на мкл геномной РНК SARS-CoV-2 в качестве предела и поэтому был выбран в качестве рабочего набора праймеров, используемых в последующих анализах RT-LAMP.

Геномная РНК и вирус в буфере для обнаружения в реакциях RT-LAMP.

Следующие компоненты включали анализ RT-LAMP: 4 мМ MgSO 4 (New England Biolabs), 1x конечная концентрация буфера для изотермической амплификации (New England Biolabs), 1,025 мМ каждого из дезоксирибонуклеозидтрифосфатов и 0,29 M Бетаин (Сигма-Олдрич). Отдельные исходные компоненты хранили в соответствии с инструкциями производителя, и конечная смесь, включающая все компоненты, была свежеприготовлена ​​перед каждой реакцией. Наряду с буферными компонентами смесь праймеров, состоящая из 0.К реакционной смеси добавляли 15 мкМ F3 и B3, 1,17 мкМ прямой внутренний праймер (FIP) и обратный внутренний праймер (BIP) и 0,59 мкМ LoopF ​​и LoopB. Наконец, 0,47 Ед / мкл ДНК-полимеразы BST 2.0 WarmStart (New England Bioloabs), 0,3 Ед / мкл обратной транскриптазы WarmStart (New England Biolabs), 1 мг / мл бычьего сывороточного альбумина (New England Biolabs) и 0,735 × EvaGreen (Biotium). были включены в реакцию. Краситель EvaGreen — это краситель, интеркалирующий двухцепочечную ДНК. После добавления шаблона конечный объем реакции составил 16 мкл.Все реакции с матрицей геномной РНК в буфере TE включали 2 мкл матрицы, чтобы конечный реакционный объем составлял 16 мкл.

Все анализы RT-LAMP вне чипа проводили в 0,2 мл пробирках для ПЦР в системе для ПЦР в реальном времени Eppendorf Mastercycler realplex при 65 ° C в течение 60 мин. Данные флуоресценции регистрировали каждые 1 мин после каждого цикла реакции. Для каждой реакции делали по три повтора.

Реакции, проводимые с инактивированными нагреванием вирусами, включали стадию термического лизиса. Образцы вирусов, сначала последовательно разведенные в буфере TE, подвергали термическому лизированию в нагревателе при 95 ° C в течение 1 мин перед их добавлением в конечную реакционную смесь.

Все реакции RT-LAMP состояли из не шаблонных отрицательных контролей, которые были включены во все наборы данных.

Обнаружение вируса в носовой жидкости.

Назальная жидкость была коммерчески получена от Innovative Research, и было подтверждено, что образцы жидкости были получены до пандемии COVID-19. Серийно разведенные термоинактивированные вирусы SARS-CoV-2 в буфере TE добавляли непосредственно в назальную жидкость таким образом, чтобы концентрация вирусного образца в назальной жидкости составляла от 50 БОЕ / мкл до 0.005 БОЕ / мкл (от 5E5 до 50 копий на мкл). Затем вирус в образце назальной жидкости подвергали термическому лизированию при 95 ° C в течение 1 мин перед добавлением смеси реагентов RT-LAMP до общего реакционного объема 16 мкл. Объемы образцов варьировались таким образом, чтобы объем пробы назальной жидкости с добавкой составлял 12,5%, 25% или 50% от общего реакционного объема. Одна реакция была проведена в том же формате, в котором общий реакционный объем составлял 96 мкл, из которых 48 мкл составлял объем образца. Во всех этих реакциях концентрации всех других компонентов реакции поддерживались, как указано выше для 16 мкл реакции.

Обнаружение вирусов в вирусных транспортных средах.

Кроме того, реакции проводились с инактивированными нагреванием вирусами в VTM. CDC-совместимый VTM был получен от Redoxica (VTM-500ML), разделен на аликвоты и хранится при 4 ° C вдали от прямого света. Вирусы серийно разводили в VTM до исходных концентраций образца в диапазоне от 0,5 до 0,005 БОЕ / мкл (от 5000 копий на мкл до 50 копий на мкл). Затем образцы подвергали термическому лизированию при 95 ° C в течение 1 мин перед добавлением смеси реагентов RT-LAMP до общего реакционного объема 16 мкл.Были протестированы два разных объема образцов, в которых вирус в образце VTM составлял либо 12,5% (образец 2 мкл), либо 50% (образец 8 мкл) от общего реакционного объема. В этих реакциях концентрации буфера, праймера, полимеразы и других компонентов реакции поддерживались постоянными, как указано выше, в пределах 16 мкл реакции.

Обнаружение вируса в носовой жидкости, собранной на мазках NP.

CDC-одобренные тампоны NP (стерильные аппликаторы с наконечником из полиэстера) были коммерчески получены от Fisher Scientific.Как описано выше, серийно разведенные термоинактивированные вирусы SARS-CoV-2 в VTM вводились непосредственно в назальную жидкость, так что концентрация вирусного образца в назальной жидкости варьировалась от 25 БОЕ / мкл до 0,0025 БОЕ / мкл (от 2,5E5 до 250 копий на мкл). Добавленная назальная жидкость (20 мкл) сначала абсорбировалась тампоном NP, а затем переносилась в 100 мкл VTM. Мазок перемешивали в VTM от 30 с до 1 мин для переноса вируса из тампона NP. После удаления тампона образец VTM был распределен на аликвоты образцов и подвергнут термическому лизированию при 95 ° C в течение 1 мин.Наконец, остальные реагенты для реакции RT-LAMP были добавлены к образцу до общего реакционного объема 16 мкл.

Анализ данных внекристальной амплификации.

Кривые флуоресценции RT-LAMP вне чипа и гистограммы пороговых значений амплификации были проанализированы с использованием сценария MATLAB и построены с использованием GraphPad Prism 8. Для каждой кривой пороговое время принималось как время, необходимое для достижения каждой кривой 20% от общая интенсивность. Гистограммы порога амплификации показывают среднее значение и стандартное отклонение трех образцов.

Микрожидкостный картридж аддитивного производства.

На рис. 4 C показан одноразовый полимерный картридж, разработанный для быстрого обнаружения SARS-CoV-2 в VTM. Трехмерная конструкция состоит из микрофлюидных каналов на передней и задней сторонах, соединенных сквозными отверстиями 1,7 мм × 0,7 мм 2 на конце каждого змеевидного микроканала. Чип был разработан и аддитивно изготовлен как единый компонент для выполнения трех функций на кристалле. Сначала термически лизированный образец пациента и реагенты RT-LAMP вводятся через охватывающие соединители Luer Lock из двух отдельных шприцев без использования микрофлюидных насосов.Каждый порт доступа напрямую соединен с каналом непрерывного трехмерного потока Y-образной впускной областью. Затем образец проходит через область трехмерного микромиксера, где поток совершает вертикальный поворот от одной грани к другой между каждым горизонтальным разворотом. На верхней грани имеется семь змеевидных каналов и восемь на нижней, причем каждый змеевидный микроканал имеет ширину 0,7 мм, глубину 0,4 мм и длину 8 мм. Чередование горизонтальных и вертикальных разворотов улучшает перемешивание и обеспечивает плотную упаковку смесительной структуры.Наконец, жидкость течет в шесть резервуаров, которые радиально окружают разветвление проточного канала. Эти резервуары для детектирования, расположенные на конце чипа, рассчитаны на объем примерно 20 мкл на камеру. Камеры усиления имеют стенку толщиной 0,5 мм и два выходных отверстия диаметром 1,1 мм для удаления лишнего воздуха при заполнении.

Картридж был изготовлен из жесткого полиуретана (RPU) на принтере Carbon M2 с использованием стандартных настроек процесса, промыт и затем отвержден. Ориентация печати для этой детали была нижней стороной чипа, прикрепленного к сборочному лотку, и отверстиями для жидкости замка Люэра, обращенными вверх.После изготовления картридж снова промывали водой и сушили сжатым воздухом. Передняя и задняя стороны картриджа были покрыты прозрачной биосовместимой лентой (ARSeal , Adhesive Research), чтобы запечатать чип. Прозрачная лента позволяет проводить визуальный осмотр во время заполнения и визуализацию во время обнаружения. После наложения ленты с помощью иглы в ленте были проделаны два отверстия для каждого резервуара; эти отверстия служат выходами воздуха во время заполнения.

Изготовление подставок и флуоресцентная визуализация на базе смартфонов.

Микрожидкостный диагностический картридж совместим с прибором, показанным на рис. 4 D и E . Мы использовали смартфон (Huawei P30 Pro, Huawei) для обнаружения флуоресцентного излучения с помощью встроенных в кристалл LAMP-тестов. Инструмент состоит из четырех основных частей для поддержки оптических, электрических и нагревательных компонентов. В верхней части прибора находится смартфон и совмещается его камера с макрообъективом (12,5 ×, Techo-Lens-01, Techo). Макрообъектив позволяет получать изображение чипа крупным планом (расстояние до изображения ~ 50 мм).Второй компонент, печатная плата (PCB) и держатель фильтра, оснащен фильтром длинного прохода (525 нм, 84-744, Edmund Optics), который позволяет только свету, испускаемому красителем EvaGreen, достигать камеры. Печатная плата согласована с этим длиннопроходным фильтром и управляет освещением устройства. Всего восемь светодиодов (λpeak = 485 нм, XPEBBL, Cree) установлены на печатной плате по кругу для обеспечения равномерного освещения всей области диагностики. Четыре короткопроходных фильтра (490 нм, 490SP RapidEdge, Omega Filters), покрывающие каждую пару светодиодов, устанавливаются наверху печатной платы для возбуждения красителя EvaGreen.Третий компонент, а именно основной корпус подставки, содержит два отдельных двухпозиционных переключателя и батарейные блоки для управления печатной платой и нагревателем. Наконец, под картриджем расположен саморегулирующийся нагреватель с положительным температурным коэффициентом (PTC) (12 В-80 ° C, Uxcell). Механизм блокировки соединяет основной и нижний компоненты, открывает и обеспечивает доступ к микросхеме, которую нужно вставить в подставку. При установке только диагностическая область чипа контактирует с нагревательной пластиной, которая поддерживает температуру 65 ° C в течение периода усиления.

Смартфон делал фотографии чипа с 10-минутными интервалами в первые 30 минут анализов, а затем с 2-минутными интервалами для захвата большего количества точек данных амплификации в течение следующих 10 минут. Настройки изображения смартфона: Международная организация по стандартизации (ISO) = 500 и время экспозиции = 0,5 с.

Загрузка чипа вирусного образца и компонентов анализа RT-LAMP.

Для экспериментов на кристалле с клиническими образцами VTM и образцами VTM с добавками образец загружали в шприц на 1 мл.Реагенты RT-LAMP были приготовлены вне чипа, а затем загружены в шприц на 5 мл. Все концентрации реагентов поддерживали как в 16-мкл реакционной смеси. Оба шприца были прикреплены к чипу, и образец был загружен на чип без использования шприцевого насоса. После того, как образец и реакционные реагенты были загружены в чип, отверстия под пулами пирогов были закрыты вторым двусторонним клеевым слоем для предотвращения утечки или испарения во время инкубации RT-LAMP. Чип помещали в переносную подставку и зажимали магнитными полосками, так что пулы пирогов имели хороший контакт с нагревателем PTC на протяжении всего этапа инкубации RT-LAMP.Инкубация происходила при 65 ° C в течение 60 мин с мониторингом в реальном времени.

Изображение чипа и анализ данных.

Флуоресцентные изображения были записаны с помощью IP-веб-камеры в смартфонах и сохранены в формате JPG, из которого интенсивность флуоресценции и базовая флуоресценция были проанализированы на изображении J. Интенсивность флуоресценции для всех шести пулов круговых диаграмм была измерена, усреднена и нанесена на график на GraphPad Prism 8. ROC-анализ был выполнен на GraphPad Prism 8.

Цепочка поставок ресурсов, необходимых для настольного анализа RT-LAMP, по сравнению с тестом RT-PCR в масштабе.

Мы количественно оценили ресурсы, необходимые для расширения анализа RT-LAMP, и сравнили его с обычным тестом RT-PCR. Для каждого теста мы рассмотрели три сценария, в которых количество образцов пациентов составляет 80, 800 или 8000 (приложение SI , дополнительный текст , рис. S11, а также таблица S3 и набор данных S1).

Доступность данных.

Все данные исследования включены в статью SI и приложение .

Благодарности

Следующие реагенты были депонированы Центрами по контролю и профилактике заболеваний и получены через BEI Resources, Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний (NIAID), NIH: 1) Геномная РНК из коронавируса 2, связанного с SARS, Isolate USA -WA1 / 2020, NR-52285; 2) Коронавирус 2, связанный с атипичной пневмонией, Isolate USA-WA1 / 2020, Heat Inactivated, NR-52286.Мы благодарим сотрудников лаборатории микро- и нанотехнологий Холоньяка в Университете Иллинойса в Урбане-Шампейне (UIUC) за содействие в проведении исследований и финансирование из Университета Иллинойса. Микрожидкостные диагностические картриджи были предоставлены Fast Radius Inc. R.B. and E.V. Выражаем благодарность за поддержку A.G. со стороны NIH R21 AI146865A. Мы признательны за частичную поддержку А. по соглашению о сотрудничестве с Университетом Пердью и Службой сельскохозяйственных исследований Министерства сельского хозяйства США (через суб-присуждение 8000074077 UIUC).Мы благодарим W.P.K. за поддержку Соглашения о сотрудничестве D19AC00012, предоставленного Агентством перспективных исследовательских проектов Министерства обороны США компании W.P.K. и R.B., чтобы поддержать M.Y.A., J.B. и E.V. NSF поддержка F.S. под грантом 1534126 признается. Мы также благодарим Сару Риггенбах, Габриэля Коха и Билла Бонда из OSH Healthcare, Пеория, Иллинойс, за их поддержку IRB-1602513 и сбор образцов пациентов для этого исследования. Мы благодарим за поддержку гранта NSF Rapid Response Research (RAPID) (Награда 2028431) и фонда Jump Applied Research через общественное здравоохранение посредством инженерии и моделирования (ARCHES) через Центр инженерных систем здравоохранения в UIUC.

Сноски

  • Вклад авторов: A.G., A.M., M.Y.A., S.A.S.d.R., W.P.K. и R.B. разработали исследования; A.G., A.M., J.B., M.Y.A. и F.S. проведенное исследование; A.G., M.Y.A., B.T.C., W.P.K. и R.B. предоставили новые реагенты / аналитические инструменты; A.G., A.M., E.V., W.P.K. и R.B. проанализировали данные; и A.G., A.M., J.B., M.Y.A., S.A.S.d.R., E.V., B.T.C., W.P.K. и R.B. написали статью.

  • Заявление о конкурирующих интересах: W.P.K. является соучредителем и главным научным сотрудником Fast Radius Inc., где был изготовлен картридж аддитивного изготовления. B.T.C. работает консультантом и имеет финансовые интересы в Reliant Immune Diagnostics.

  • Эта статья представляет собой прямое представление PNAS.

  • Эта статья содержит вспомогательную информацию в Интернете по адресу https://www.pnas.org/lookup/suppl/doi:10.1073/pnas.2014739117/-/DCSupplemental.

  • Copyright © 2020 Автор (ы). Опубликовано PNAS.

Molecular LAMP COVID-19 Test — Accel Diagnostics

Эта страница содержит информацию, которая поможет вам понять риски и преимущества молекулярных тестов на COVID-19, набора Lucira COVID-19 All-In-One Test Kit.Если после прочтения этой страницы у вас возникнут вопросы или вы хотите обсудить предоставленную информацию, обратитесь к своему врачу. Для получения самой последней информации о COVID-19 посетите веб-страницу CDC по коронавирусной болезни 2019 (COVID-19): https://www.cdc.gov/COVID19.

Какой тип теста представляет собой тест Lucira COVID-19? Тест Lucira COVID-19 — это первый и единственный молекулярный диагностический тест FDA EUA in vitro, разрешенный как для использования в медицинских учреждениях, так и для домашнего использования по рецепту.Это молекулярный тест, который усиливает генетический материал вируса, в то время как тест выполняется так же, как лабораторные тесты ПЦР. Lucira использует метод амплификации, который показал свою эффективность, эквивалентную известным высокочувствительным ПЦР-анализам.

Насколько точен этот тест? В двух исследованиях сообщества, в которых участвовали люди как с симптомами COVID-19, так и без них, тест Люциры достиг 96% точности по сравнению с одним из лучших ПЦР-тестов FDA EUA, тестом Hologic Panther Fusion SARS-CoV-2.Исключая образцы выше 37,5 ° C с очень низким уровнем вируса, который, возможно, больше не отражает активную инфекцию, Lucira достигла 98% точности, 97% положительного процентного согласия (PPA) и 98% отрицательного процентного согласия (NPA) по сравнению с компаратором Hologic Panther Fusion. (Исследование сообщества Lucira 07A-CLI 006, осень 2020 г. и исследование сообщества Lucira 07A-CLI 007, зима 2021 г. (n = 404)).

Может ли этот тест обнаружить новые варианты SARS-CoV-2? Тест Lucira обнаруживает B.1.1.7 (Великобритания), B.1.351 (Южная Африка), P.1 (Бразилия) и B.1.427 / B.1.429 (Калифорния) варианты SARS-CoV-2. Lucira Health осуществляет регулярное наблюдение за появляющимися штаммами SARS-CoV-2 и будет продолжать отслеживать ситуацию с появляющимися вариантами. Узнайте больше о Lucira на сайте www.lucirahealth.com

Одобрение FDA: Тест Lucira COVID-19 предназначен только для разрешения FDA на использование в чрезвычайных ситуациях (EUA). Этот тестовый набор не был одобрен или одобрен. Этот тестовый набор разрешен только на период действия заявления о существовании обстоятельств, оправдывающих разрешение на экстренное использование диагностики in vitro для обнаружения и / или диагностики COVID-19 в соответствии с разделом 564 (b) (1) Федерального закона по контролю за продуктами и лекарствами. , и Закон о косметике, 21 U.S.C. § 360bbb-3 (b) (1), если авторизация не будет прекращена или отозвана раньше.

Что означает положительный результат теста? Если у вас положительный результат теста, вполне вероятно, что у вас COVID-19, потому что в вашем образце была обнаружена РНК вируса, вызывающего COVID-19. Следовательно, также вероятно, что вас могут изолировать, чтобы избежать распространения вируса среди других. Вы должны следовать рекомендациям CDC, чтобы снизить потенциальную передачу заболевания. Существует очень небольшая вероятность того, что этот тест может дать положительный результат, который является неправильным (ложноположительный результат), особенно при использовании в популяции, не имеющей многих случаев заражения COVID-19.Ваш лечащий врач будет работать с вами, чтобы определить, как лучше всего заботиться о вас, на основе результатов анализов, истории болезни и ваших симптомов.

Что означает отрицательный результат теста? Отрицательный результат теста означает, что в вашем образце не была обнаружена РНК вируса, вызывающего COVID-19. Однако этот тест может дать отрицательный результат, который является неверным (ложноотрицательным) у некоторых людей с COVID-19. Это означает, что у вас все еще может быть COVID-19, даже если тест отрицательный.Если ваш результат теста отрицательный, ваш лечащий врач рассмотрит результат теста вместе со всеми другими аспектами вашей истории болезни (такими как симптомы, возможные воздействия и географическое расположение мест, которые вы недавно посетили), чтобы решить, как заботиться о вас.

Чем отличается изотермическая амплификация от ПЦР при диагностическом тестировании на коронавирусную болезнь 2019 (COVID-19)?

  • Аль-Садек Д.В., Насралла Г.К. Заболеваемость новым коронавирусом SARS-CoV-2 среди бессимптомных пациентов: систематический обзор. Int J Заразить Дис . 2020 Сентябрь 98: 372-80. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Оран Д.П., Тополь Э.Дж. Распространенность бессимптомной инфекции SARS-CoV-2: обзорный обзор. Энн Интерн Мед. 2020 Сентябрь 1. 173 (5): 362-7. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Центры по контролю и профилактике заболеваний. Временные рекомендации по сбору, обработке и тестированию клинических образцов на COVID-19. Доступно по адресу http://www.cdc.gov/coronavirus/2019-nCoV/lab/guidelines-clinical-specimens.html. Дата обращения: 26 октября 2020 г.

  • Hanson KE, Caliendo AM, Arias CA, et al. Руководство Американского общества инфекционных болезней по диагностике COVID-19. Клин Инфект Дис . 2020 16 июня. [Medline]. [Полный текст].

  • Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. Обновление по коронавирусу (COVID-19): FDA санкционирует первую систему тестирования на COVID-19, направленную непосредственно к потребителю. FDA. Доступно по адресу https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/coronavirus-covid-19-update-fda-authorizes-first-direct-consumer-covid-19-test-system.9 декабря 2020 г .; Дата обращения: 10 декабря 2020 г.

  • Эрдман С.Л. FDA разрешило первую безрецептурную тест-систему на Covid-19 для домашнего использования. CNN Здоровье . 9 декабря 2020 г. Доступно по адресу https://www.cnn.com/2020/12/09/health/fda-over-counter-covid-test/index.html.

  • Центры по контролю и профилактике заболеваний. Обзор тестирования на SARS-CoV-2 (COVID-19). Доступно по адресу https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/hcp/testing-overview.html. Дата обращения: 26 октября 2020 г.

  • Центры по контролю и профилактике заболеваний. Временное руководство по тестированию медицинского персонала на SARS-CoV-2. Доступно по адресу https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/hcp/testing-healthcare-personnel.html. Дата обращения: 26 октября 2020 г.

  • Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. Коронавирусная болезнь 2019 (COVID-19) Разрешения на экстренное использование медицинских устройств. FDA. Доступно по адресу https://www.fda.gov/medical-devices/emergency-use-authorizations-medical-devices/coronavirus-disease-2019-covid-19-emergency-use-authorizations-medical-devices.Актуально на 3 августа 2020 г .; Дата обращения: 26 октября 2020 г.

  • Волошин С., Патель Н., Кессельхайм А.С. Ложноотрицательные тесты на инфекцию SARS-CoV-2 — проблемы и последствия. N Engl J Med . 2020 6 августа. 383 (6): e38. [Медлайн]. [Полный текст].

  • [Рекомендации] Hanson KE, Caliendo AM, Arias CA, et al. Руководство Американского общества инфекционистов по диагностике COVID-19: молекулярно-диагностическое тестирование. IDSA. Доступно по адресу https: // www.idsociety.org/practice-guideline/covid-19-guideline-diagnostics/. 23 декабря 2020 г .; Дата обращения: 7 января 2021 г.

  • Фреллик М. Группа экспертов IDSA обновляет рекомендации по молекулярным диагностическим тестам на COVID. Медицинские новости Medscape . 2021 6 января [Полный текст].

  • Батлер-Лапорт Г., Лаванди А., Шиллер И. и др. Сравнение тестов амплификации нуклеиновых кислот в слюне и мазке из носоглотки для обнаружения SARS-CoV-2: систематический обзор и метаанализ. JAMA Intern Med . 2021 15 января

  • van Kasteren PB, van der Veer B, van den Brink S, et al. Сравнение семи коммерческих диагностических наборов ОТ-ПЦР для COVID-19. Дж. Клин Вирол . 2020 Июль 128: 104412. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Лю X, Ван Л., Сакхивел С.К. и др. Панель ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени США CDC для выявления тяжелого острого респираторного синдрома, коронавирус 2. Emerg Infect Dis . 2020 Август.26 (8): [Medline]. [Полный текст].

  • Корман В.М., Ландт О., Кайзер М. и др. Обнаружение нового коронавируса 2019 года (2019-nCoV) методом ОТ-ПЦР в реальном времени. евро Surveill . 2020 25 января (3): [Medline]. [Полный текст].

  • Chan JF, Yip CC, To KK, et al. Улучшенная молекулярная диагностика COVID-19 с помощью нового высокочувствительного и специфического анализа COVID-19-RdRp / Hel в реальном времени с обратной транскрипцией-ПЦР, подтвержденная In vitro и клиническими образцами. Дж Клин Микробиол . 2020 23 апреля. 58 (5): [Medline]. [Полный текст].

  • Chu DKW, Pan Y, Cheng SMS и др. Молекулярная диагностика нового коронавируса (2019-nCoV), вызывающего вспышку пневмонии. Clin Chem . 2020 г. 1. 66 (4): 549-55. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Центры по контролю и профилактике заболеваний. Классификации и определения вариантов SARS-CoV-2. CDC. Доступно по адресу https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/variants/variant-info.html. Обновлено 15 июня 2021 г .; Дата обращения: 17 июня 2021 г.

  • Линии ПАНГО. Доступно на https://cov-lineages.org/. Дата обращения: 17 июня 2021 г.

  • Всемирная организация здравоохранения. Отслеживание вариантов SARS-CoV-2. ВОЗ. Доступно по адресу https://www.who.int/en/activities/tracking-SARS-CoV-2-variants/. Дата обращения: 17 июня 2021 г.

  • Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. Генетические варианты SARS-CoV-2 могут привести к ложноотрицательным результатам молекулярных тестов на обнаружение SARS-CoV-2 — письмо персоналу клинической лаборатории и поставщикам медицинских услуг.FDA. Доступно по адресу https://www.fda.gov/medical-devices/letters-health-care-providers/genetic-variants-sars-cov-2-may-lead-false-negative-results-molecular-tests-detection- SARS-CoV-2. 8 января 2021 г .; Дата обращения: 11 января 2021 г.

  • Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. Вирусные мутации SARS-CoV-2: влияние на тесты COVID-19. FDA. Доступно по адресу https://www.fda.gov/medical-devices/coronavirus-covid-19-and-medical-devices/sars-cov-2-viral-mutations-impact-covid-19-tests. 3 июня 2021 г .; Дата обращения: 17 июня 2021 г.

  • Всемирная организация здравоохранения. Еженедельное эпидемиологическое обновление COVID-19. Доступно по адресу https://reliefweb.int/sites/reliefweb.int/files/resources/20210608_Weekly_Epi_Update_43.pdf. 8 июня 2021 г .; Дата обращения: 17 июня 2021 г.

  • Группа по расследованию COVID-19. Клинические и вирусологические характеристики первых 12 пациентов с коронавирусной болезнью 2019 г. (COVID-19) в США. Нат Мед . 2020 июня 26 (6): 861-8. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Вельфель Р., Корман В.М., Гуггемос В., Сейлмайер М., Занге С., Мюллер М.А. и др. Вирусологическая оценка госпитализированных пациентов с COVID-2019. Природа . 2020 май. 581 (7809): 465-9. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Young BE, Ong SWX, Kalimuddin S, et al. Эпидемиологические особенности и клиническое течение пациентов, инфицированных SARS-CoV-2 в Сингапуре. ЯМА . 2020 21 апреля 323 (15): 1488-94. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Аронс М.М., Хатфилд К.М., Редди С.К. и др.Пресимптомные инфекции SARS-CoV-2 и передача в учреждении квалифицированного сестринского ухода. N Engl J Med . 2020 28 мая. 382 (22): 2081-90. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Корман В.М., Рабенау Х.Ф., Адамс О. и др. Бессимптомные и симптоматические пациенты с SARS-CoV-2 и риск трансфузионной передачи. Переливание крови . 2020 июн 60 (6): 1119-22. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Уолш К.А., Джордан К., Клайн Б. и др. Обнаружение SARS-CoV-2, вирусная нагрузка и инфекционность в течение инфекции. J Заразить . 2020 Сентябрь 81 (3): 357-71. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Куцирка Л.М., Лауэр С.А., Лаиендекер О., Бун Д., Лесслер Дж. Вариация ложноотрицательной скорости тестов SARS-CoV-2 на основе полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой в зависимости от времени с момента воздействия. Энн Интерн Мед. 2020 18 августа. 173 (4): 262-7. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Perera RAPM, Tso E, Tsang OTY, et al. Культура вируса SARS-CoV-2 и субгеномная РНК для респираторных образцов от пациентов с легким коронавирусным заболеванием. Экстренная инфекция . 2020 26 ноября (11): 2701-4. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Long QX, Tang XJ, Shi QL и др. Клинико-иммунологическая оценка бессимптомных инфекций SARS-CoV-2. Нат Мед . 2020 26 августа (8): 1200-4. [Медлайн]. [Полный текст].

  • McKie AM, Jones TPW, Sykes C. Длительное выделение вируса у иммунокомпетентного пациента с COVID-19. BMJ Case Rep . 2020 4 октября. 13 (10): [Medline]. [Полный текст].

  • Li TZ, Cao ZH, Chen Y, et al. Продолжительность выделения РНК SARS-CoV-2 и факторы, связанные с длительным выделением вируса у пациентов с COVID-19. J Med Virol . 2020 июля 9. [Medline]. [Полный текст].

  • Xiao AT, Tong YX, Zhang S. Профиль ОТ-ПЦР для SARS-CoV-2: предварительное исследование с участием 56 пациентов с COVID-19. Клин Инфект Дис . 2020 апр 19, [Medline]. [Полный текст].

  • Вилли А.Л., Фурнье Дж., Казановас-Массана А. и др.Образцы слюны или мазка из носоглотки для выявления SARS-CoV-2. N Engl J Med . 2020 24 сентября. 383 (13): 1283-6. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Голландия PM, Abramson RD, Watson R, Gelfand DH. Обнаружение специфического продукта полимеразной цепной реакции с использованием 5 ‘—- 3’ экзонуклеазной активности ДНК-полимеразы Thermus aquaticus. Proc Natl Acad Sci U S A . 1991 15 августа. 88 (16): 7276-80. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Тиллетт Р.Л., Севинский Д.Р., Хартли П.Д., Кервин Х., Кроуфорд Н., Горзальский А. и др.Геномные доказательства реинфекции SARS-CoV-2: тематическое исследование. Ланцет Инфекция Дис . 12 октября 2020 г. [Medline]. [Полный текст].

  • Чжао Ю., Чен Ф, Ли К., Ван Л., Фан К. Изотермическое усиление нуклеиновых кислот. Chem Rev. . 2015 25 ноября. 115 (22): 12491-545. [Медлайн].

  • Broughton JP, Deng X, Yu G, et al. Обнаружение SARS-CoV-2 на основе CRISPR-Cas12. Нат Биотехнология . 2020 июл. 38 (7): 870-4. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Guo L, Sun X, Wang X и др. Обнаружение SARS-CoV-2 с помощью диагностики CRISPR. Ячейка Discov . 2020. 6:34. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Hinton DM. Набор для тестирования Lucira COVID-19 All-In-One — Разрешение. FDA. Доступно по адресу https://www.fda.gov/media/143810/download. 17 ноября 2020 г .; Дата обращения: 10 декабря 2020 г.

  • Brooks M. FDA одобрило первый экспресс-тест на COVID в домашних условиях. Медицинские новости Medscape .2020 18 ноября. [Полный текст].

  • Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. Обновление по коронавирусу (COVID-19): FDA выдает разрешение на проведение первого безрецептурного молекулярного теста в домашних условиях. Доступно по адресу https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/coronavirus-covid-19-update-fda-issues-authorization-first-molecular-non-prescription-home-test?utm_medium=email&utm_source= govdelivery. 5 марта 2021 г .; Дата обращения: 5 марта 2021 г.

  • Berensmeier S. Магнитные частицы для разделения и очистки нуклеиновых кислот. Приложение Microbiol Biotechnol . 2006 декабрь 73 (3): 495-504. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Cheng MP, Papenburg J, Desjardins M, et al. Диагностическое тестирование на коронавирус 2, связанный с тяжелым острым респираторным синдромом: обзорный обзор. Энн Интерн Мед. 2020 2 июня. 172 (11): 726-34. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Отдел новостей Quest Diagnostics. Заявление Quest Diagnostics в СМИ о тестировании на COVID-19. Доступно на https: // отдел новостей.questdiagnostics.com/COVIDTestingUpdates. Дата обращения: 26 октября 2020 г.

  • Американское общество микробиологии. Нехватка поставок, влияющая на тестирование на COVID-19 и не на COVID. Доступно по адресу https://asm.org/Articles/2020/September/Clinical-Microbiology-Supply-Shortage-Collecti-1. Дата обращения: 26 октября 2020 г.

  • Американская ассоциация клинической химии. Исследование по тестированию на коронавирус. Доступно на https://www.aacc.org/science-and-research/covid-19-resources/aacc-covid-19-testing-survey.Дата обращения: 26 октября 2020 г.

  • Батлер-Ву С.М., Уолд-Диклер Н., Холтом П., Зангвилл К.М., Ван ТТ. Недостаточное распределение: критические препятствия в цепочке поставок отрицательно влияют на способность общинных больниц проводить повторное тестирование на SARS-CoV-2. Дж Клин Микробиол . 2020 24 августа. 58 (9): [Medline]. [Полный текст].

  • Van TT, Miller J, Warshauer DM, et al. Объединение образцов мазков из носоглотки / горла для увеличения возможностей тестирования на вирусы гриппа с помощью ПЦР. Дж Клин Микробиол . 2012 Март 50 (3): 891-6. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Cherif A, Grobe N, Wang X, Kotanko P. Моделирование пульного тестирования для выявления пациентов с коронавирусной болезнью 2019 в условиях ограниченной доступности тестов. Открытие сети JAMA . 2020 г., 1. 3 (6): e2013075. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Бейтман А.С., Мюллер С., Гюнтер К., Шулт П. Оценка эффекта разбавления объединения образцов на чувствительность ПЦР-тестов SARS-CoV-2. J Med Virol . 2020 16 сентября [Medline]. [Полный текст].

  • Торрес И., Альберт Э., Наварро Д. Объединение образцов мазков из носоглотки для обнаружения SARS-CoV-2 с помощью ОТ-ПЦР. J Med Virol . 2020 5 мая. [Medline]. [Полный текст].

  • Центры по контролю и профилактике заболеваний. Временное руководство по быстрому тестированию антигенов на SARS-CoV-2. Доступно по адресу https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/resources/antigen-tests-guidelines.html. Дата обращения: 26 октября 2020 г.

  • Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. Обновление по коронавирусу (COVID-19): FDA разрешает тест на антиген в качестве первого безрецептурного полностью домашнего диагностического теста на COVID-19. FDA. Доступно по адресу https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/coronavirus-covid-19-update-fda-authorizes-antigen-test-first-over-counter-fully-home-diagnostic?utm_medium= электронная почта & utm_source = govdelivery. 15 декабря 2020 г .; Дата обращения: 15 декабря 2020 г.

  • Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США.Обновление по коронавирусу (COVID-19): FDA выдает новое разрешение для домашнего теста BinaxNOW COVID-19 Ag Card. FDA. Доступно по адресу https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/coronavirus-covid-19-update-fda-issues-new-authorization-binaxnow-covid-19-ag-card-home-test? utm_medium = электронная почта & utm_source = govdelivery. 16 декабря 2020 г .; Дата обращения: 16 декабря 2020 г.

  • Brooks M. FDA одобрило быстрые внебиржевые тесты на COVID для серийного бессимптомного скрининга. Медицинские новости Medscape .2021 г., 1 апреля [Полный текст].

  • Диннес Дж., Дикс Дж. Дж., Адриано А. и др. Экспресс-тесты на антиген в месте оказания медицинской помощи и молекулярные тесты для диагностики инфекции SARS-CoV-2. Кокрановская база данных Syst Rev . 2020 26 августа 8: CD013705. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Young S, Taylor SN, Cammarata CL, et al. Клиническая оценка эффективности теста BD Veritor SARS-CoV-2 в месте оказания помощи по сравнению с тестированием на основе ПЦР и тестом на антиген SARS Sofia 2 в месте оказания помощи. Дж Клин Микробиол . 2020 6 октября [Medline]. [Полный текст].

  • Ченг М.П., ​​Янсуни С.П., Баста Н.Э. и др. Серодиагностика тяжелого острого респираторного синдрома, связанного с коронавирусом 2: обзорный обзор. Энн Интерн Мед. 2020 Сен 15. 173 (6): 450-60. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Центры по контролю и профилактике заболеваний. Временные рекомендации по тестированию на антитела к COVID-19. Доступно по адресу https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/resources/antibody-tests-guidelines.html. Обновлено 1 августа 2020 г .; Дата обращения: 26 октября 2020 г.

  • Long QX, Liu BZ, Deng HJ и др. Ответы антител на SARS-CoV-2 у пациентов с COVID-19. Нат Мед . 2020 июня 26 (6): 845-8. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Айер А.С., Джонс Ф.К., Нодушани А. и др. Устойчивость и ослабление ответов человеческих антител на рецептор-связывающий домен спайкового белка SARS-CoV-2 у пациентов с COVID-19. Sci Immunol . 2020 окт 8.5 (52): [Medline]. [Полный текст].

  • Guo L, Ren L, Yang S, et al. Профилирование раннего гуморального ответа для диагностики нового коронавирусного заболевания (COVID-19). Клин Инфект Дис . 2020 28 июля. 71 (15): 778-85. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Хуанг А.Т., Гарсия-Каррерас Б., Хитчингс МДТ и др. Систематический обзор опосредованного антителами иммунитета к коронавирусам: кинетика, корреляты защиты и связь с тяжестью. Нац Коммуна .2020 17 сентября. 11 (1): 4704. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Вашист СК. Диагностические тесты на COVID-19 in vitro: последние достижения и новые тенденции. Диагностика (Базель) . 2020 5 апреля. 10 (4): [Medline]. [Полный текст].

  • Jiang S, Hillyer C, Du L. Нейтрализующие антитела против SARS-CoV-2 и других коронавирусов человека: (Trends in Immunology 41, 355-359; 2020). Тенденции Иммунол . 2020 Июнь 41 (6): 545. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Espejo AP, Akgun Y, Al Mana AF, et al. Обзор современных достижений в серологическом тестировании на COVID-19. Ам Дж. Клин Патол . 2020 5 августа 154 (3): 293-304. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Sheridan C. Быстрые портативные тесты доступны онлайн для сдерживания пандемии коронавируса. Нат Биотехнология . 2020 май. 38 (5): 515-8. [Медлайн].

  • Whitman JD, Hiatt J, Mowery CT, et al. Оценка эффективности серологических тестов на SARS-CoV-2. medRxiv . 2020 17 мая. [Medline]. [Полный текст].

  • Американская ассоциация клинической химии. Рекомендации AACC по серологическому тестированию на SARS-CoV-2. Доступно по адресу https://www.aacc.org/science-and-research/covid-19-resources/statements-on-covid-19-testing/aacc-recommendations-for-sars-cov-2-serology-testing. 18 мая 2020 г .; Дата обращения: 26 октября 2020 г.

  • Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. Рекомендации по исследованию плазмы выздоравливающего COVID-19.Доступно по адресу https://www.fda.gov/vaccines-blood-biologics/investigational-new-drug-ind-or-device-exemption-ide-process-cber/recommendations-investigational-covid-19-convalescent-plasma. 2 сентября 2020 г .; Дата обращения: 26 октября 2020 г.

  • Макнамара Д. Тестирование антител не полезно для подтверждения иммунитета среди вакцинированных: FDA. Медицинские новости Medscape . 2021, 19 мая. [Полный текст].

  • Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. Краткое описание FDA: FDA не рекомендует использовать результаты теста на антитела к SARS-CoV-2 для оценки иммунитета или защиты от COVID-19, в том числе после вакцинации.Доступно по адресу https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/fda-brief-fda-advises-against-use-sars-cov-2-antibody-test-results-evaluate-immunity-or- защита. 19 мая 2021 г .; Дата обращения: 20 мая 2021 г.

  • Riphagen S, Gomez X, Gonzalez-Martinez C, Wilkinson N, Theocharis P. Гипервоспалительный шок у детей во время пандемии COVID-19. Ланцет . 2020 23 мая. 395 (10237): 1607-8. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Sperotto F, Friedman KG, Son MBF, VanderPluym CJ, Newburger JW, Dionne A.Кардиологические проявления при мультисистемном воспалительном синдроме, ассоциированном с SARS-CoV-2, у детей: всесторонний обзор и предлагаемый клинический подход. Eur J Педиатр . 2020 15 августа [Medline]. [Полный текст].

  • Моррис С.Б., Шварц Н.Г., Патель П. и др. Серия случаев мультисистемного воспалительного синдрома у взрослых, связанного с инфекцией SARS-CoV-2 — Соединенное Королевство и США, март-август 2020 г. MMWR Morb Mortal Wkly Rep . 2020 Октябрь 9. 69 (40): 1450-6.[Медлайн]. [Полный текст].

  • Whittaker E, Bamford A, Kenny J, et al. Клинические характеристики 58 детей с детским воспалительным мультисистемным синдромом, временно связанным с SARS-CoV-2. ЯМА . 2020 21 июля. 324 (3): 259-69. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Brooks M. FDA предоставило EUA устройству для скрининга на COVID-19 для бессимптомных людей. Медицинские новости Medscape . 2021 22 марта [Полный текст].

  • Центры по контролю и профилактике заболеваний.Новые варианты SARS-CoV-2. CDC. Доступно по адресу https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/more/science-and-research/scientific-brief-emerging-variants.html. Обновлено 3 января 2021 г .; Дата обращения: 11 января 2021 г.

  • SARS-CoV-2 Прямое обнаружение без выделения РНК с петлевой изотермической амплификацией (LAMP) и CRISPR-Cas12

    Front Med (Лозанна). 2021; 8: 627679.

    Альфредо Гарсиа-Вензор

    1 Лаборатория функциональной геномики рака, Instituto Nacional de Medicina Genómica, Мехико, Мексика

    Bertha Rueda-Zarazua

    1 Лаборатория функциональной геномики рака, Лаборатория функциональной геномики рака Genómica, Мехико, Мексика

    Eduardo Marquez-Garcia

    2 Отделение молекулярной биологии, Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias, Мехико, Мексика

    Vilma Maldonado

    3 Лаборатория эпигенетики Мексики, Instituto Nacónacó City, Mexico

    Angelica Moncada-Morales

    2 Отделение молекулярной биологии, Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias, Мехико, Мексика

    Хирам Оливера

    4 Instituto Nacional de Referencia 900, Мексика, Мексика, город эпидемиология,

    Лопес

    4 Instituto Nacional de Refer encia Epidemiológica, Мехико, Мексика

    Joaquin Zuñiga

    2 Подразделение молекулярной биологии, Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias, Мехико, Мексика

    Jorge Melendez-Zajgla Laboratory, Nacional Genitomacional Cancer. Genómica, Мехико, Мексика

    1 Лаборатория функциональной геномики рака, Instituto Nacional de Medicina Genómica, Мехико, Мексика

    2 Отделение молекулярной биологии, Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias, Мехико, Мексика

    35 Лаборатория эпигенетики, Instituto Nacional de Medicina Genómica, Мехико, Мексика

    4 Instituto Nacional de Referencia Epidemiológica, Мехико, Мексика

    Под редакцией: Лей Чен, Школа медицины Шанхайского университета Цзяо Тонг, Китай

    Рецензия: Антонио Дженнаро Никотера, Мессинский университет, Италия; Шуайинь Чен, Университет Чжэнчжоу, Китай

    Эта статья была отправлена ​​в раздел «Инфекционные болезни — наблюдение, профилактика и лечение» журнала «Границы в медицине»

    Поступила в редакцию 9 ноября 2020 г .; Принята в печать 25 января 2021 года.

    Copyright © 2021 Гарсия-Вензор, Руэда-Сарасуа, Маркес-Гарсия, Мальдонадо, Монкада-Моралес, Оливера, Лопес, Зуньяга и Мелендес-Зайгла.

    Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License (CC BY). Использование, распространение или воспроизведение на других форумах разрешено при условии указания автора (авторов) и правообладателя (ов) и ссылки на оригинальную публикацию в этом журнале в соответствии с принятой академической практикой.Запрещается использование, распространение или воспроизведение без соблюдения этих условий.

    Abstract

    На сегодняшний день во всем мире зарегистрировано более 49 миллионов подтвержденных случаев коронавирусной болезни 19 (COVID-19). Текущие диагностические протоколы используют qRT-PCR для обнаружения вирусной РНК, что является дорогостоящим и требует сложного оборудования, обученного персонала и предварительного выделения РНК. По этой причине нам нужен более быстрый, прямой и более универсальный метод обнаружения для лучшего эпидемиологического управления вспышкой COVID-19.В этой работе мы предлагаем прямой метод без экстракции РНК, основанный на методе изотермической амплификации, опосредованной петлей (LAMP) и кластеризованном с регулярными интервалами коротких палиндромных повторах-CRISPR-ассоциированном белке (CRISPR-Cas12), который позволяет быстро обнаруживать SARS-CoV. -2 из образцов пациентов с высокой чувствительностью и специфичностью. Мы получили предел обнаружения 16 копий / мкл с высокой специфичностью и по доступной цене. Считывание диагностического теста может быть выполнено с помощью термоциклера для ПЦР в реальном времени или невооруженным глазом в трансиллюминаторе синего света.Наш метод был протестирован на небольшом наборе клинических образцов и дал многообещающие результаты.

    Ключевые слова: COVID-19, SARS-CoV-2, диагностика, LAMP, CRISPR-Cas12a

    Введение

    Глобальная вспышка COVID-19, вызванная вирусом SARS-Cov-2, является одной из основных глобальных проблем из-за быстрого распространения по миру. Официальные цифры на 7 ноября 2020 года — 49 636 193 подтвержденных случая заболевания и 1247 187 смертей на всей планете (Университет Джона Хопкинса, https: // coronavirus.jhu.edu/map.html; последний доступ 07 ноября).

    Точный и быстрый скрининг возможных инфицированных субъектов является одной из основных стратегий сдерживания вспышки COVID-19, снижения воздействия на смертность населения и предотвращения переполнения больниц. Однако современные диагностические стратегии в основном состоят из анализа qRT-PCR, который имеет недостатки, так как требует выделения РНК и, таким образом, занимает несколько часов для получения результата. Эти аспекты препятствовали применимости систем qRT-PCR для эффективного сдерживания вспышки COVID-19 (1).

    По этим причинам чрезвычайно важно разработать новые диагностические методы, которые улучшают стоимость, увеличивают количество диагностических средств, способных выполнять анализы, и время, необходимое для получения результата. Технология петлевой изотермической амплификации (LAMP) позволяет специфическую амплификацию последовательности целевой ДНК или РНК при одной температуре (в отличие от трех этапов, необходимых для ПЦР), обеспечивая непрерывную целевую амплификацию, что делает ее более универсальной, чем ПЦР.LAMP ранее использовался для диагностики различных патогенов с низкой стоимостью, высокой чувствительностью и специфичностью (2–5).

    Недавно Zhang et al. (6) использовали технологию LAMP для специфического обнаружения SARS-CoV-2, наблюдая многообещающие результаты, которые могут иметь прямое применение в текущей вспышке COVID-19. Эти результаты позволили нам воспользоваться универсальностью и чувствительностью LAMP для стандартизации диагностического набора для обнаружения SARS-CoV-2 в условиях ограниченных ресурсов.

    В этой работе мы разработали практический метод диагностики SARS-CoV-2 с использованием реакции LAMP для амплификации определенной области мРНК гена SARS-CoV-2 N и протестировали три основных метода обнаружения: накопление флуоресценции, колориметрическое обнаружение и LbCas12a. -опосредованное обнаружение. Полученные результаты показали, что лучший предел обнаружения (LOD) был получен при использовании термоциклера для количественной ПЦР для измерения накопления флуоресценции с течением времени. Интересно, что колориметрический подход давал сопоставимые LOD, чем детектирование с помощью флуоресценции.Однако его зависимость от изменений pH делает его ненадежным для использования с плохо забуференными образцами, такими как слюна.

    Материалы и методы

    Праймеры и зонды

    Мы использовали два разных набора праймеров для нашего диагностического анализа: один нацелен на транскрипт гена SARS-CoV-2 N, а другой — на мРНК человеческой RNAseP POP7. Секвенирование праймеров было получено из предыдущей работы, а используемые последовательности перечислены в дополнительной таблице 1 (7). Для контроля мы синтезировали фрагмент мРНК гена N и мРНК RNAseP POP7 в виде генных блоков (gBlocks) (IDT, Cal., США) (дополнительная таблица 2). Кроме того, для работы с контролем гена SARS-CoV-2 N РНК, gBlock был in vitro, транскрибировали с использованием набора RiboMAX Large Scale RNA Production System и следуя инструкциям производителя (P1280, Promega, MA, США). Число копий РНК N-гена определяли, используя ее молярную концентрацию, и ее серийно разбавляли для получения группы разведений известного числа копий, используемых для расчета с ограничением вычислений (LOD).

    Для обнаружения бактерии Lachnospiraceae Cas12a (LbCas12), опосредованной обнаружением, мы использовали две ранее разработанные направляющие РНК (гРНК), нацеленные на ген SARS-CoV-2 N и ампликоны RNAseP POP7.Последовательность gRNA показана в дополнительной таблице 3. Также для считывания флуоресценции LbCas12 мы использовали зонд Taqman (5’FAM / 3’BHQ1), который, как предполагается, разлагается при специфической активации LbCas12a.

    LAMP Reactions

    Реакции флуоресцентной LAMP проводили с использованием набора WarmStart LAMP (E1700L, New England Biolabs, NE, США), и колориметрическую смесь WarmStart LAMP 2X Master Mix (M1800L, New England Biolabs, NE, США) использовали для колориметрической НАПОЛЬНАЯ ЛАМПА. Все реакции с LAMP проводили в соответствии с инструкциями производителя, на каждый 29 мкл реакции мы использовали 2.5 мкл смеси праймеров LAMP (F3, B3: 2 мкМ, LF, LB: 4 мкМ и FIP, BIP: 16 мкМ), 5 мкл образца или контроля и концентрация MgSO 4 была увеличена до 6 мМ путем добавления 1,13 мкл на реакцию 100 мМ раствора. Для колориметрических и флуоресцентных реакций LAMP амплификацию проводили путем инкубации при 65 ° C в течение 40 мин. Для флуоресцентного детектирования LAMP-реакций в реальном времени мы использовали термоциклер QuantStudio 3 Real-Time PCR system (ThermoFisher Scientific, Массачусетс, США), используя программу ПЦР, состоящую из 160 циклов по 15 с каждый.Количественную оценку флуоресценции по конечной точке проводили в многомодовом детекторе Beckman Coulter DTX 880 (Beckman Coulter, Ньон, Швейцария) с использованием фильтров излучения и возбуждения FAM. Прямая визуализация флуоресценции проводилась в настольном трансиллюминаторе.

    Обнаружение LbCas12a

    Для обнаружения, опосредованного LbCas12a, мы использовали коммерческий LbaCas12a (EnGen LbaCas12a, M0653T, NEB, NE), а РНК была синтезирована в виде олигонуклеотидов РНК IDT (Калифорния, США). Во-первых, комплексы LbaCas12a-gRNAs были созданы путем инкубации LbaCas12a (50 нМ, конечная концентрация) и gRNA (62.5 нМ) в 1X NEBuffer 2.1 в конечном объеме 20 мкл на реакцию. Комплексы LbaCas12a-гРНК инкубировали 30 мин при 37 ° C, после инкубации добавляли зонд Такмана до конечной концентрации 500 нМ и переносили на лед. После завершения реакции LAMP 2 мкл каждой реакции LAMP добавляли к 20 мкл комплексов LbaCas12a-gRNA, и реакции инкубировали при 37 ° C в течение 10 мин. Регистрация флуоресценции в реальном времени осуществлялась с помощью термоциклера QuantStudio 3 Real-Time PCR system (ThermoFisher Scientific, Массачусетс, США) с использованием программы qPCR из 80 циклов по 15 с при 65 ° C.Визуальный контроль флуоресценции проводили с использованием трансиллюминатора синего света (Invitrogen, CA, USA).

    In silico Выравнивание

    Мы использовали blastn от NCBI для выравнивания in silico , мы сравниваем каждую последовательность праймера с основным вирусом и бактериями, которые вызывают симптомы, похожие на covid-19, или связаны с вирусом SARS-CoV. -2 (Candida albicans taxid: 5476, Neisseria meningitidis taxid: 487, pseudomonas aeruginosa taxid: 287, Staphylococcus aureus taxid: 1280, Таксид гриппа A: 11320, Taxid гриппа B: 11520, летучая мышь MERS-like coronavirus taxid: 26-64423, Таксид CoV: 1335626, таксид HCoV-SARS: 694009, таксид HCoV-229E: 11137, таксид HCoV-OC43: 31631, таксид HCoV-NL63: 277944 и таксид HCoV-HKU1: 2).

    Кривые ROC и значения AUC

    Кривые рабочих характеристик приемника (ROC) и значения площади под кривой ROC (AUC) были рассчитаны с использованием пакета pROC R (1.16.2) со значениями порога цикла (Ct) LOD кривые или оценка образцов пациентов по флуоресцентным LAMP-реакциям или качественные значения использования вариации Cas12a. Случаи без амплификации считались Ct = 160. AUC, равная 50%, случайно связана с положительным результатом, в то время как мы считаем процент выше 90% приемлемым и точным результатом.

    Обработка образца и экстракция РНК

    Для определения LOD мы добавили известное количество копий РНК N-гена к 8 мкл мазка из носа здорового донора, а затем добавили 2 мкл 5-кратного лизирующего раствора (0,5 M DTT и 5 мМ EDTA. ). Образцы инкубировали при 42 ° C в течение 20 минут, затем при 64 ° C в течение 5 минут. Эти шаги позволили нуклеазную инактивацию и лизис биологического материала с высвобождением нуклеиновой кислоты без экстракции. Пять микролитров этих инактивированных образцов добавляли к 20 мкл реакции LAMP и обрабатывали, как указано ранее.Кроме того, этот простой метод инактивации использовался для инактивации вирусов и лизиса образцов от пациентов.

    Пациенты

    Институциональный наблюдательный совет (IRB) Национального института респираторных заболеваний (INER) рассмотрел и утвердил протоколы исследований COVID-19. Этот проект был одобрен IRB под регистрационным номером B09-20. Все субъекты или их юридические ответственные лица, особенно в случае тяжелобольных пациентов, предоставили письменное информированное согласие на эти исследования и разрешили хранение своих носоглоточных образцов в репозиториях INER для этого и будущих исследований.В этом исследовании мы не собирали образцы от несовершеннолетних / детей, были включены только молодые люди старше 17 лет.

    Всего в отделении молекулярной биологии «Unidad de Biología Molecular» Национального института респираторных заболеваний в Мехико было собрано 34 образца пациентов. Мы собрали 31 мазок из носа и 3 образца слюны у лиц, которые обратились в отделение неотложной помощи института в период с 01 марта по 31 мая 2020 г .; совпало с ростом вспышки COVID-19 в Мехико.Экстракцию РНК проводили путем добавления 2 мкл раствора для лизиса (DTT 0,5 M и EDTA 5 мМ) к 8 мкл образца с последующей инкубацией при 42 ° C в течение 20 минут и 64 ° C в течение 5 минут. Для реакций LAMP мы использовали 5 мкл экстрагированных образцов для амплификации гена SARS-CoV-2 N и 5 мкл для амплификации POP7. Измерение флуоресценции в реальном времени проводили с использованием системы ПЦР в реальном времени StepOnePlus (ThermoFisher, MA, США) для реакций RT-qPCR и LAMP. Присутствие вирусного транскрипта сначала оценивали с помощью одностадийной ОТ-ПЦР с модифицированным методом Берлина, внутренне стандартизованным, с использованием специфических олигонуклеотидных последовательностей для генов E и RdRp (2019-nCoV) и подтверждали тестом LAMP.

    Анализ для обнаружения SARS-CoV-2 с помощью метода LAMP-LbCas12a

    Пробирка для анализа LAMP содержала 24 мкл смеси с праймерами LAMP и ферментом Bst. В эту пробирку добавляли 5 мкл образца или контроля и инкубировали в течение 40 мин при 65 ° C. По истечении этого времени 2 мкл этой реакции добавляли в пробирку LbCas12a, содержащую комплекс фермент-гРНК и репортер. Реакцию инкубировали в течение 10 мин при 37 ° C для наблюдения или измерения флуоресценции ().

    LAMP-Cas12 диагностический метод для обнаружения SARS-CoV-2.На схеме показаны действия по обнаружению вирусов. Из предыдущего инактивированного клинического образца мы добавляем смесь LAMP, содержащую специфические праймеры, которые нацелены на N-ген вируса и амплифицируют его, если он присутствует в образце. Одновременно с этим фермент LbCas12a инкубируется со специфичной для N-гена гРНК, через 30 мин добавляется репортер, содержащий флуорофор. Когда комплекс LbCas12a-gRNA находит свою мишень, он подвергается неспецифическому расщеплению репортера, который высвобождает флуорофор и испускает флуоресценцию.

    Результаты

    Чувствительность и специфичность обнаружения SARS-CoV-2 LAMP

    Для обнаружения вируса SARS-CoV-2 мы использовали два ранее опубликованных набора праймеров, один нацелен на конкретную область N-гена SARS-CoV-2 и человеческий контрольный набор, нацеленный на ген RNAseP POP7 (3). Набор N-генов обнаружил присутствие вируса COVID-19, тогда как набор POP7 был контролем на наличие человеческих транскриптов. Анализ выравнивания выполняли для оценки специфичности праймеров для амплификации LAMP для N-гена.Мы рассмотрели основные патогены, вызывающие респираторные симптомы, такие как Covid-19. Не было обнаружено перекрестного выравнивания с каким-либо вирусом или бактериями, что свидетельствует о высокой специфичности последовательностей, используемых для обнаружения. Для обнаружения амплификации мы использовали две основные системы: флуоресценцию и колориметрию. Для системы флуоресцентного обнаружения мы добавили интеркалирующий краситель ATTO с аналогичными спектрами поглощения / излучения, чем SYBR-зеленый, в реакции LAMP. Увеличение флуоресценции регистрировали с помощью термоциклера для ПЦР в реальном времени, а окончательную флуоресценцию — с помощью флуориметра для многолуночного планшета.Колориметрический анализ основан на подкислении реакционного буфера системой амплификации, что может быть обнаружено колориметрическим датчиком pH. Эта система обнаружения имеет то преимущество, что не требует дополнительных устройств обнаружения, кроме человеческого глаза. Кроме того, чтобы улучшить применимость метода к реальным потребностям врачей, мы стандартизировали быстрый метод инактивации и лизиса образцов, основанный на высоких температурах и восстановительных условиях. С этой целью мы приготовили раствор для лизиса с 5-кратной концентрацией, добавили 1 мкл раствора для лизиса на каждые 4 мкл назального мазка и нагрели образцы при 42 ° C в течение 20 минут, а затем при 64 ° C в течение 5 минут.

    Во-первых, мы хотели определить предел обнаружения этих анализов, для этого мы использовали синтетическую РНК N-гена SARS-CoV-2, разведенную до определенной концентрации числа копий с использованием 5 мкл объема образца на реакцию ( ). Обнаружение в реальном времени амплификации LAMP в термоциклере для количественной ПЦР показало 100% -ную скорость обнаружения (LOD) в образцах с 66 копиями / мкл после 30 минут амплификации (). Чтобы увеличить LOD, мы увеличили время реакции до 50 мин. Даже когда мы обнаружили снижение LOD на 6.6 копий / мкл, эта модификация также увеличивала вероятность ложноположительного обнаружения, поскольку доля амплифицированных NTC увеличилась до 40% (). По этой причине мы увеличили количество образцов, подтвердив LOD с 66 копиями / мкл после 40 мин амплификации (). Анализ кривой ROC показал, что LOD 66 копий / мкл представляет собой хороший результат с точки зрения специфичности и чувствительности (AUC 99,4%, CI 95 = 98–100%) ().

    Таблица 1

    Количество копий в образцах.

    3,3 0 9099 9 9 9 реакции LAMP с помощью флуоресценции в реальном времени с 30 и 50 мин.

    Образец сП / 5 мкл образца сП / мкл
    NTC 0 0
    S33 33 6,6
    S55 55 11
    S82 85 17
    330 66
    S550 550 110
    S1000 1,000 200
    S1600 1,600 3203 S1600 1,600 320
    39 N3 N3 на 30 мин. S3 %
    Положительный сигнал
    Образцы N1 N2 N2 Дет. при 50 мин.
    NTC 0% 40%
    S16.5 + + + 60% 80%
    S33 + + + — 9099% 100%
    S55 + + + + + 100% 100%
    S82 + + + + 100% 100%
    S165 + + + + 80% 100%
    + + 100% 100%
    S550 + + + + + 100% 10099% 98 + + + + + 100% 100%
    S1600 + + + + 100998

    Таблица 3

    Предел обнаружения реакции LAMP по флуоресценции в реальном времени.

    N16 NS NS 90 997108 129 81% 909 97103 38 39 для значений концентрация копий резко возросла с SARS-CoV-2.Набор данных, используемый для построения кривых ROC и значений AUC, соответствует кривым LOD для флуоресцентных LAMP-реакций, проанализированных с помощью термоциклера реального времени. При разведении 330 копий мы можем наблюдать приемлемую точность теста (AUC> 90,0%).

    Специфичность реакции LAMP N-гена оценивалась с использованием образцов общей РНК человека (MCF-7) без транскриптов N-гена (). Мы наблюдали, что образцы MCF-7 ведут себя как образцы NTC (данные не показаны). Как и ожидалось, мы наблюдали специфическую амплификацию в образцах MCF-7 с использованием набора праймеров POP7.Кроме того, мы использовали панель контроля, включая грипп A / h2N1 / pdm09, Influenza B и другие распространенные человеческие коронавирусы, такие как HCoV-NL63, HCoV-HKU1, HCoV-OC43 и HCoV-229E, для проверки специфичности теста. Все случаи были отрицательными на SARS-CoV-2, поэтому перекрестной реактивности с этими вирусами нет.

    Визуальные результаты флуоресцентных и колориметрических систем LAMP. (A) Типичные изображения визуального контроля флуоресцентных реакций LAMP с использованием УФ-трансиллюминатора, флуоресценция воспринимается в реакциях 66 и 320 копий / 5 мкл. (B) Репрезентативные изображения кривых LOD колориметрических LAMP-реакций: положительные реакции изменяются в сторону желтого цвета, а отрицательные остаются розовыми. (C) Репрезентативные изображения положительных и отрицательных колориметрических результатов LAMP.

    Затем мы проанализировали окончательную флуоресценцию LAMP-реакций с использованием флуориметра для многолуночных планшетов и фильтра флуоресцеина изотиоцианата (FITC). Результаты показали, что окончательное обнаружение флуоресценции было менее чувствительным, чем обнаружение флуоресценции в реальном времени, поскольку LOD, полученный для окончательного обнаружения флуоресценции, составлял 1000 копий ().Эти результаты подчеркивают, что окончательное обнаружение флуоресценции флуорометром показало сильное падение чувствительности и воспроизводимости.

    Таблица 4

    Предел обнаружения реакции LAMP по конечной флуоресценции.

    Сигнал положительности (значения Ct)
    Образец N1 N2 N3 N6 N7 N8 N9 N10 N11 N12
    N17 N18 N19 N20 N21 Дет 40 мин NS NS 152 158 -90 998 130 NS NS NS 157 980 5 NS NS 89 79 86 120 146 123 114 110 NS 102 124 NS 119 129 133 NS 126 67%
    S55 78 84 109 96 77 77 14099 NS 114 114 NS NS 113 NS 129 115 NS 119 NS 71% 109 99 106 91 114 99 112 160 120 138 NS NS 142 100 127 NS 104 114 111 86%
    S165 104 87 S165 104 87 NS 138 142 134 122 119 106 NS 114 108 107 121 110
    S330 101 111 118 106 96 130 121 131 104 115 98 95 100 95 106 68 104 104 100%
    S550 95 85 106 114 130 142 90 118 120 110 106 105 85 124 105 77 100%
    S1600 25 26 25 26 25 38 38 42 32 32 33 33 32 33 32 33 31 32 100%
    9099 910 С с цветом

    Было продемонстрировано, что рические реакции легко и быстро анализируются на глаз.Затем мы стремились установить пределы этой системы обнаружения. Мы проанализировали LOD колориметрических LAMP-реакций. Для этого мы добавили в образцы мазка из носа известное количество синтетических транскриптов N-гена, инактивировали и лизировали эти образцы. LOD, полученный для этих образцов с добавками, составлял 66 копий / мкл, как и LOD, полученный с помощью флуоресценции в реальном времени (). Мы обнаружили, что реакция N-гена с 320 копиями / мкл изменила цвет реакции в сторону желтого, в отличие от реакции NTC, которая оставалась розовой ().

    Наконец, чтобы уменьшить предел обнаружения системы обнаружения LAMP, мы доказали другую систему обнаружения флуоресценции, основанную на реакциях LbCas12a. LbCas12a представляет собой бактериальную эндонуклеазу, которая распознает и гидролизует последовательность целевой ДНК, комплементарную последовательности направляющей РНК (гРНК). Интересно, что как только LbCas12a распознает и гидролизует свою последовательность-мишень, он активирует эндонуклеазный домен, который разрушает любую доступную молекулу ДНК (коллатеральная нуклеазная активность). Чтобы использовать это свойство LbCas12a, мы сконструировали две мРНК, нацеленные на N-ген и POP7, и мы усилили сигнал путем добавления гашеного ДНК-зонда, который флуоресцирует после разрушения активированным LbCas12a.Для реакций LbCas12a мы добавили 5 мкл реакции LAMP, предварительно инкубированной в течение 30 мин. Интересно, что регистрация флуоресценции LbCas12a в реальном времени показала, что эта система обнаружения улучшает LOD простой реакции LAMP, измеренной с помощью ПЦР в реальном времени, до 16 копий / мкл (). Это также улучшило визуальное обнаружение реакции LAMP с использованием трансиллюминатора синего света ().

    Таблица 5

    Предел обнаружения реакции LbCas12a по конечной флуоресценции.

    Положительность сигнала
    Образцы N1 N2 N3
    0%
    S16.5 0%
    S33 + 20% 20%
    S82 + 20%
    S165 + %
    S330 + 20%
    S550 + + + + + 100%
    S1600 + + + + 100%
    9099 7 —
    Положительность сигнала
    Образец N1 N2 N3
    N7 N8 N9 N10 N11 N12 N13 9099 9099 9033 9033 9033 N13 9099 9099
    NTC 0%
    S40 + + + + 26%
    S80 + + + + + + + + + + + + + 100% + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
    S550 + + + + + + + + + + + + + + 100%
    S1600 + + + + + + + + + + + + 100%

    Визуальные результаты dCas12-опосредованного обнаружения.Результаты показывают репрезентативное изображение сигналов флуоресценции в реакциях dCas12a. Как видно, положительные сигналы светятся зеленым цветом при освещении синим светом. Однако отрицательные сигналы имеют очень слабое свечение.

    Наконец, мы доказали эффективность нашей системы обнаружения SARS-CoV-2 на образцах пациентов, ранее проанализированных методом RT-qPCR. Как показано на рисунке, реакции LAMP показали хорошую эффективность в обнаружении вирусных транскриптов SARS-CoV-2 в образцах пациентов. Однако, используя кПЦР в качестве стандарта, мы наблюдали, что флуоресцентная система LAMP не смогла обнаружить два из двенадцати отрицательных образцов.Кроме того, флуоресцентная система LAMP показала точность десяти из десяти в положительных образцах, с которой мы получили значение AUC кривой ROC 90,8%, CI 95 = 77,6–100% ().

    Таблица 6

    Эффективность ЛАМПЫ в образцах пациентов.

    9998 9997 Положительный 9997 15 8 9998 9998 Положительный
    Образец Источник Результат КПЦР Результат ЛАМПЫ
    1 Экстракция 9998 Отрицательный Отрицательный
    3 Носовой тампон Отрицательный Отрицательный
    4 Назальный тампон Отрицательный Отрицательный 7 Отрицательный 7 Отрицательный 7 Отрицательный 7
    6 Носовой тампон Отрицательный Отрицательный
    7 Назальный тампон Отрицательный Отрицательный
    Отрицательный N мазок asal Отрицательный Положительный
    10 Слюна Отрицательный Отрицательный
    11 Слюна 7 Отрицательный 7 Отрицательный 7 Отрицательный 7 Отрицательный
    13 Экстракция Положительная Положительная
    14 Экстракция Положительная Положительная
    Положительная 9998 9099 9099 Назальный мазок Положительный Положительный
    17 Назальный мазок Положительный Положительный
    18 Назальный мазок Положительный Положительный Положительный Положительный
    20 Назальный мазок Положительный Положительный
    21 Назальный мазок Положительный Положительный
    Положительный Положительный

    Кривые ROC и значения AUC в тесте, проведенном с образцами пациентов. (A) Кривая ROC и значение AUC были рассчитаны с использованием значений Ct флуоресцентных LAMP-реакций с использованием образцов пациентов, предварительно проверенных методом ПЦР в реальном времени. (B) Кривая ROC и значение AUC учитывают качественные результаты повышения Cas12a, использованные в проверенных образцах пациентов.

    Результаты, полученные к этому моменту, предполагают, что реакции LAMP являются надежным методом обнаружения SARS-CoV-2. Поскольку усиление может быть обнаружено несколькими методами, колориметрический метод является наиболее универсальным для применения в полевых условиях, а флуоресцентный метод в дополнение к системе LbCas12a более разумен и легче интерпретируется, если медицинское учреждение считает с помощью термоциклера в реальном времени () .Эта система улучшает кривую ROC, достигая значения AUC 100,0%, CI 95 = 100–100% с использованием образцов пациентов, предварительно проверенных стандартным методом qPCR (). Кроме того, реакции LAMP подходят для прямого использования образцов из методов быстрого лизиса, как описано здесь.

    Таблица 7

    Эффективность Cas12a в образцах пациентов.

    923 тампон 9998
    Образец Происхождение Результат КПЦР Результат Cas12a
    1 Негатив 8 9999 Отрицательный Отрицательный
    3 Носовой тампон Отрицательный Отрицательный
    4 Носовой тампон 9899 Отрицательный 9899 9899 Отрицательный 9099 Отрицательный
    6 Носовой мазок Отрицательный Отрицательный
    7 Назальный мазок Положительный Положительный
    Положительный Положительный 9 Назальный мазок Положительный Положительный
    10 Назальный мазок Положительный Положительный
    11 Назальный тампон Положительный Положительный Положительный Положительный

    Наш протокол обнаружения LAMP / Cas12 — это простой и универсальный метод, преимущество которого заключается в получении результата всего за 65 минут с момента получения образца.Процедура заключается в обработке образца буфером для лизиса при двух температурах, которые могут быть достигнуты почти всеми термоблоками (20 мин при 42 ° C и 5 мин при 65 ° C). Затем следует амплификация гена SARS-CoV-2 N с помощью реакции LAMP, которая выполняется за 30 минут, и, наконец, обнаружение конкретных ампликонов с использованием системы Cas12a / crRNA, которое может быть достигнуто за 10 минут. Считывание результата может быть выполнено с помощью термоциклера в реальном времени или лампы синего света в непонятных условиях ().

    Обсуждение

    Вспышка COVID-19 стала одной из важнейших проблем общественного здравоохранения на глобальном уровне.В отсутствие одобренной вакцины раннее и надежное обнаружение вируса среди всего населения — наша лучшая стратегия сдерживания летальности COVID-19 и благоприятного насыщения. В настоящей работе мы разработали новый тест обнаружения SARS-CoV-2, который позволяет быстро обнаруживать транскрипт вирусного гена N после простой, быстрой и дешевой процедуры выделения РНК. Кроме того, технология LAMP позволяет проводить универсальный диагностический тест, который может быть выполнен с использованием любой водяной бани, способной нагреваться до 65 ° C, и может быть обнаружен в лучшем случае с помощью термоциклера в реальном времени, а также невооруженным глазом, если оборудование отсутствует.

    В этой работе мы протестировали несколько методов обнаружения, чтобы разработать более универсальный и чувствительный диагностический тест для вируса COVID-19. Основываясь на флуоресцентных и колориметрических показаниях, мы обнаружили, что колориметрическая система является более универсальной и легко развертываемой стратегией, но имеет недостатки, заключающиеся в том, что в образцах с малым количеством копий изменение цвета трудно четко воспринимать, и ее чувствительность к образцам с плохой буферизацией. Однако детектирование флуоресценции в реальном времени дало более легко интерпретируемые результаты, но требует использования термоциклера для ПЦР в реальном времени, что практически невозможно получить за пределами нескольких объектов.Кроме того, чтобы повысить чувствительность нашего диагностического теста, мы оценили интеграцию LbCas12a для усиления сигнала, генерируемого реакцией LAMP. Однако полученные результаты показали, что увеличение флуоресценции из-за активности LbCas12a (из-за LAMP-ампликонов) имеет линейное поведение, которое усиливает больше LAMP-сигналов. Следовательно, добавление LbCas12a улучшает LOD, полученный только в результате реакции LAMP.

    По сравнению с другими диагностическими технологиями, оцененными другими группами, наша система обнаружения SARS-CoV-2 превосходит почти все доступные в настоящее время диагностические системы с точки зрения скорости, поскольку используемый протокол инактивации сократил время извлечения РНК до 25 минут.Разработанной системе LAMP требуется всего 40 минут для получения результата, и если мы реализуем систему LbCas12a, мы добавим еще 10 минут к протоколу, намного меньше времени по сравнению с 4 часами, используемыми в протоколах CDC / ВОЗ (8, 9), и аналогичен другим протоколам LAMP (30–45 мин) (6, 10) или протоколам на основе Crispr, таким как CRISPR Trans Reporter с направленной ДНК-эндонуклеазой (DETECTR) (30 мин) или Разблокирование специфического высокочувствительного ферментативного репортера (SHERLOCK) (58 мин), в этих методах используется аналогичный протокол выделения РНК (11).Однако, поскольку другие диагностические технологии используют дорогостоящий по времени протокол извлечения РНК, наш протокол быстрой инактивации для извлечения нуклеиновых кислот дает нам общее время 65–75 минут для получения результата, начиная с момента приема образца. Кроме того, протокол выделения РНК, необходимый для всех методов, может представлять риск заражения и заражения. В этом случае мы сокращаем обработку выборки, используя ее напрямую.

    Важно отметить, что колориметрическая система LAMP имеет ряд преимуществ по сравнению с другими системами с точки зрения ее применимости.Температуры инкубации, используемые во всем протоколе, могут быть достигнуты с использованием общей водяной бани, а окончательные результаты теста могут быть легко получены путем визуального осмотра. Кроме того, наш опыт показал, что колориметрические мастер-миксы LAMP (с праймерами) можно хранить при 4 ° C до недели. Эти преимущества делают колориметрические LAMP-тесты многообещающей технологией для улучшения вирусной диагностики в полевых условиях, легко адаптируемой к потребностям врачей (3). Однако, поскольку колориметрическое считывание LAMP достигается за счет снижения pH, эти реакции чувствительны к образцам без хорошей буферной системы, что приводит к увеличению количества ложноотрицательных результатов.

    Разработанная диагностическая система SARS-CoV-2 LAMP показала чувствительность 66 копий на мкл, что сопоставимо с уровнем детализации DETECTR (70–300 копий на мкл) (3) или SHERLOCK (10–100 копий на мкл). (11). И если мы используем систему LbCas12a, этот LOD улучшается до 16 копий на мкл. По сравнению с другими диагностическими методами, основанными на LAMP, наша система имеет аналогичную чувствительность, поскольку Zhang et al. Сообщили о чувствительности 24 копий / мкл (2, 11, 12), а Yu et al. сообщили о чувствительности 10 копий / мл (13), что делает эти колориметрические тесты почти такими же чувствительными, как qPCR.Однако протокол RT-qPCR (CDC / WHO) по-прежнему является наиболее чувствительным методом диагностики, предел обнаружения составляет около 1–3 копий на мкл (4, 8). Кроме того, значение LOD, достигнутое в нашей диагностической системе, показало хорошую способность обнаруживать вирус SARS-CoV-2 в образцах пациентов и показало те же результаты, что и система qRT-PCR в том же наборе. Кроме того, даже если LOD выше, чем у обычного метода, этого достаточно для обнаружения инфекции в клинических образцах, в которых количество копий в среднем составляет 676 копий на мкл (12).Настоящий метод имеет то преимущество, что объединяет два анализа без экстракции РНК, что, на наш взгляд, дает более надежный результат, чем любой из них по отдельности, поскольку он более чувствителен и специфичен, сохраняя при этом определенные технические преимущества, полезные для использования в повседневной лаборатории. Например, недавно опубликованный Pang et al. В методе (14) для реакции используется та же пробирка, но требуется предварительная экстракция РНК и более высокий уровень манипуляций, поскольку каждая пробирка должна удерживать смесь Cas12 в крышке, что подвержено ошибкам при работе с несколькими образцами.Недавно опубликованный анализ Lalli et al. (15) не требует предварительного выделения РНК, но начинается со слюны, которая, по крайней мере, в наших руках, имеет проблемы с воспроизводимостью и специфичностью, поскольку мы обнаружили, что дополнительное использование Cas12a снижает количество ложноположительных результатов. Кроме того, их метод требует добавления протеиназы К или гуанидин-изотиоцианата, что увеличивает стоимость анализа. Наконец, с точки зрения специфичности система обнаружения SARS-Cov-2 LAMP, которую мы представляем, не показала амплификации в образцах, содержащих РНК человека, и в геномах других вирусов, вызывающих респираторные заболевания.Сравнение анализов приведено в.

    Таблица 8

    Сравнение последних методов обнаружения SARS-CoV2.

    мин
    Наша работа Wang et al. (16) Панг и др. (14) Лалли и др. (15)
    Методы RT-LAMP / Cas12a RT-LAMP / Cas12a RT-LAMP / Cas12a RT-LAMP
    Время 40998 Время 40 мин. 25 мин.
    LOD 330 cp / rxn (66 cp / мкл) 5 cp / мкл 150 cp / rxn (30 cp / мкл) 59 cp / rx
    Клинические образцы 34 50 100 тампонов 30 слюна
    Экстракция РНК Нет Да Да Нет Визуализация 9999 свет УФ-свет и мобильный телефон Колориметрия и флуоресценция
    Цель Ген N S-ген Ген N и E Ген N и Orflab
    Br ief description Мы используем HUDSON (25 мин) Обе реакции одновременно в отдельных пробирках и перемешивание последние 10 мин. Обе реакции в одной пробирке и в одно и то же время. Смесь LAMP на дне и смесь Cas12 на крышке для первой инкубации, затем они смешиваются и проводят вторую инкубацию. Подобно Вангу без масла, но с другим временем и объемом Существуют две температурные инкубации образцов (65 ° / 15 мин и 95 ° / 5 мин) с последующей инкубацией в течение 25 минут.
    Объемы 24 мкл RT-LAMP + 20 мкл Cas12 + 5 мкл образца 40 мкл RT-LAMP + 20 мкл Cas12 + 1 мкл образца 25 мкл RT-LAMP + 10 мкл Cas12 + 2-10 Образец мкл 20 мкл RT-LAMP + 3 мкл образца

    В заключение, эти результаты означают, что система обнаружения SARS-CoV-2 LAMP показала среднюю чувствительность с точки зрения значения LOD, но с достаточной квалификацией для обнаружения вирус в образцах пациентов и с высокой специфичностью, которая не пересекается с человеческими транскриптомами или другими вирусными геномами.Система обнаружения SARS-CoV-2 LAMP предлагает быстрый, чувствительный и специфический вариант с минимальными требованиями к обработке проб или оборудованию для обнаружения SARS-CoV-2.

    Заявление о доступности данных

    Исходные материалы, представленные в исследовании, включены в статью / дополнительные материалы, дальнейшие запросы можно направлять соответствующим авторам.

    Заявление об этике

    Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены Комитетом по этике Instituto Nacional de Medicina Genómica.Пациенты / участники предоставили письменное информированное согласие на участие в этом исследовании.

    Вклад авторов

    AG-V, BR-Z, EM-G, AM-M и HO выполнили все эксперименты, включая анализ образцов. VM, IL и JM-Z координировали исследование. Статью написали AG-V, BR-Z, VM и JM-Z. AG-V, BR-Z, EM-G, VM и JM-Z проанализировали данные. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Благодарности

    Спасибо доктору Гизеле Себальос и доктору Магали Эспиноза за помощь и поддержку во время субклонирования плазмид. Спасибо CONACyT за специальное финансирование, сделавшее возможным этот проект. Мы благодарим доктора Густаво Рейес-Теран за его поддержку.

    Сноски

    Финансирование. Этот проект финансировался Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACyT), проект FORDECYT 03/2020.

    Ссылки

    1. Центр Дж. С. Х. С. Р. Глобальные случаи коронавируса COVID-19 Центром системных наук и инженерии (CSSE) на конференции Джона Хопкинса 2020.Балтимор: Центр Джона Хопкинса; (2020). [Google Scholar] 2. Мори Й., Нотоми Т. Петлевая изотермическая амплификация (LAMP): быстрый, точный и экономичный метод диагностики инфекционных заболеваний. J Infect Chemother. (2009) 15: 62–9. 10.1007 / s10156-009-0669-9 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Nzelu CO, Kato H, Peters NC. Петлевая изотермическая амплификация (LAMP): передовая молекулярная методика обнаружения инфекции Leishmania в месте оказания медицинской помощи. PLoS Negl Trop Dis.(2019) 13: e0007698. 10.1371 / journal.pntd.0007698 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 4. Всемирная организация здоровья . Использование петлевой изотермической амплификации (TB-LAMP) для диагностики туберкулеза легких: руководство по политике. Женева: Всемирная организация здравоохранения; (2016). [Google Scholar] 5. Секи М., Килгор П.Е., Ким Э.Дж., Охниши М., Хаякава С., Ким Д.В. Петлевые методы изотермической амплификации для диагностики бактериального менингита. Фронт Педиатр. (2018) 6:57. 10.3389 / фпед.2018.00057 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Чжан Ю., Одивуор Н., Сюн Дж., Сун Л., Ньяруба РО, Вэй Х и др. . Быстрое молекулярное определение РНК вируса SARS-CoV-2 (COVID-19) с помощью колориметрической лампы LAMP. medRxiv [препринт]. (2020). 10.1101 / 2020.02.26.20028373 [CrossRef] [Google Scholar] 7. Broughton JP, Deng X, Yu G, Fasching CL, Singh J, Streithorst J, et al. . Обнаружение SARS-CoV-2 на основе CRISPR-Cas12. Nat Biotechnol. (2020) 38: 870–4. 10.1038 / s41587-020-0513-4 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8.Центры по контролю и профилактике заболеваний . CDC 2019-Новый коронавирус (2019-nCoV) Центры диагностики RT-PCR в режиме реального времени для контроля и профилактики заболеваний. Атлантла: Центры по контролю и профилактике заболеваний; (2020). [Google Scholar] 9. Чинг Л., Чанг С.П., Неруркар В.Р. Специальная колонка COVID-19: принципы, лежащие в основе технологии обнаружения SARS-CoV-2, причины COVID-19. Гавайи J Health Soc Welf. (2020) 79: 136–142. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 10. Хуанг В.Е., Лим Б., Сюй С-С, Сюн Д., Ву В., Юй и др.. RT-LAMP для быстрой диагностики коронавируса SARS-CoV-2. Microb Biotechnol. (2020) 13: 950–61. 10.1111 / 1751-7915.13586 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Zhang F, Abudayyeh OO, Gootenberg JS. Протокол обнаружения COVID-19 с помощью диагностики CRISPR. Vol. 8. Кембридж, Массачусетс: Институт Броуда; (2020). [Google Scholar] 12. Вельфель Р., Корман В.М., Гуггемос В., Сейлмайер М., Занге С., Мюллер М.А. и др. . Вирусологическая оценка госпитализированных пациентов с COVID-2019. Природа.(2020) 581: 465–9. 10.1038 / s41586-020-2196-x [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Yu L, Wu S, Hao X, Li X, Liu X, Ye S и др. . Быстрое колориметрическое обнаружение коронавируса COVID-19 с использованием диагностической платформы с обратной транскрипцией изотермической амплификации (RT-LAMP): iLACO. medRxiv [препринт]. (2020). 10.1101 / 2020.02.20.20025874 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Панг Б., Сюй Дж., Лю И, Пэн Х, Фэн В., Цао И и др. . Изотермическая амплификация и визуализация окружающей среды в одной пробирке для обнаружения SARS-CoV-2 с использованием петлевой амплификации и технологии CRISPR.Anal Chem. (2020) 92: 16204–12. 10.1021 / acs.analchem.0c04047 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Лалли MA, Langmade JS, Chen X, Fronick CC, Sawyer CS, Burcea LC и др. . Быстрое обнаружение SARS-CoV-2 из слюны без извлечения путем колориметрической изотермической амплификации, опосредованной петлей обратной транскрипции. Clin Chem. (2020) 62. 10.1093 / Clinchem / hvaa267 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 16. Ван Р, Цянь Ц., Панг И, Ли М, Ян И, Ма Х и др. . opvCRISPR: Визуальная платформа RT-LAMP-CRISPR с одним горшком для обнаружения SARS-cov-2.Biosens Bioelectron. (2021) 172: 112766. 10.1016 / j.bios.2020.112766 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

    SARS-CoV-2 Rapid Colorimetric LAMP Assay Kit

    В наборе для быстрого колориметрического анализа LAMP SARS-CoV-2 используется петлевая изотермическая амплификация (LAMP) для обнаружения нуклеиновой кислоты SARS-CoV-2. Набор доступен только для исследовательских целей и включает мастер-смесь WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mix с UDG и смесь праймеров, нацеленную на N- и E-области вирусного генома.Предоставляются контроли для проверки эффективности анализа и включают набор праймеров для внутреннего контроля и шаблон положительного контроля. Было обнаружено, что гидрохлорид гуанидина увеличивает скорость и чувствительность реакции RT-LAMP и также включен.

    Рисунок 1: Компоненты набора для быстрого колориметрического анализа LAMP SARS-CoV-2

    Набор для быстрого колориметрического анализа SARS-CoV-2 LAMP включает мастер-смесь WarmStart Colorimetric LAMP 2X с UDG и смесь праймеров, предназначенную для регионов N и E. вирусного генома.Предоставляются контроли для проверки эффективности анализа и включают набор праймеров для внутреннего контроля и шаблон положительного контроля. Было обнаружено, что гидрохлорид гуанидина увеличивает скорость и чувствительность реакции RT-LAMP и также включен.


    Рисунок 2: Геном SARS-CoV-2 и набор для экспресс-колориметрического анализа SARS-CoV-2 Цели гена

    Набор для быстрого колориметрического анализа SARS-CoV-2 LAMP включает смесь двух праймеров, предназначенных для области генов N и E.


    WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mix с UDG представляет собой оптимизированный состав Bst 2.0 WarmStart ДНК-полимеразы и WarmStart RTx в специальном реакционном растворе с низким содержанием буфера, содержащем видимый индикатор pH для быстрого и легкого обнаружения LAMP и RT ЛАМПА-реакции. Включение dUTP и UDG в мастер-микс снижает возможность переноса загрязнения между реакциями.
    .
    Эта система обеспечивает быстрое и четкое визуальное обнаружение амплификации, основанное на продукции протонов и последующем падении pH, которое происходит из-за высокой активности ДНК-полимеразы в реакции LAMP.Снижение pH приводит к изменению цвета раствора с розового на желтый. Общее время протокола составляет 30 минут, и требуется только простое нагревательное устройство, которое может достигать 65 ° C.
    .
    Положительное обнаружение последовательности РНК SARS-CoV-2 будет обозначаться желтым цветом (произошла амплификация, высвобождены протоны, pH-зависимое изменение цвета с розового на желтый), а отрицательный результат будет обозначен розовым цветом ( не происходило ни амплификации, ни высвобождения протонов, ни изменения цвета).
    .
    Рис. 3. Рабочий процесс набора для экспресс-колориметрического анализа с помощью лампы SARS-CoV-2

    В наборе для колориметрического анализа с помощью лампы SARS-CoV-2 с каждым исследуемым образцом проводят три контрольные реакции. Перед инкубацией все реакции должны быть розовыми. Используя предоставленный протокол, реакция без матричного контроля (NTC) будет содержать все материалы тестового образца (мастер-микс, праймеры и т. Д.), За исключением самой тестовой исходной нуклеиновой кислоты, и служит мерой загрязнения реакции и на основе праймеров. неправильное усиление.Образец NTC не должен усиливаться и должен оставаться розовым на протяжении всего эксперимента. Положительный контроль (ПК) будет содержать мастер-микс, плазмиду, которая содержит N-ген SARS-CoV-2 (GenBank: MN

    7.3) и праймеры, которые будут амплифицировать эту последовательность. На ПК необходимо наблюдать за амплификацией, и после инкубации образец должен стать желтым. Внутренний контроль (IC) будет содержать мастер-микс, исходную тестируемую нуклеиновую кислоту и праймеры LAMP для rActin, эндогенного гена домашнего хозяйства. Если реагенты активны и с образцами обращались должным образом, после инкубации IC должен стать желтым.


    Рис. 4. Набор для быстрого колориметрического анализа с лампой SARS-CoV-2 поддерживает рабочие процессы тестирования по требованию и с высокой пропускной способностью

    Набор для быстрого колориметрического анализа с помощью лампы SARS-CoV-2 может использоваться для поддержки различные рабочие процессы, каждый из которых зависит от количества рекомендуемых контрольных реакций. Для тестирования по требованию с низкой пропускной способностью каждый тест требует 4 реакции: 3 контрольных (NTC, ПК и IC) и тестовый образец. Использование набора в этой настройке соответствует 24 тестовым образцам на набор NEB # E2019S (96 реакций).Для настроек с высокой пропускной способностью, когда анализируются планшеты с образцами, на каждый планшет необходимо запускать только 1 NTC и 1 ПК (рекомендуется IC для каждого тестового образца). Использование набора в этой настройке соответствует 47 тестовым образцам на набор NEB # E2019S (96 реакций).


    Рисунок 5: Быстрое, простое определение РНК SARS-CoV-2 по цвету

    Быстрый колориметрический анализ с помощью лампы SARS-CoV-2 проводился с использованием указанных контролей и либо положительного образца (человека общая РНК + синтетическая РНК SARS-CoV-2) или отрицательный образец (только общая РНК человека).Показаны действительные результаты для нематричного контроля (NTC, розовый), положительного контроля (ПК, желтый) и внутреннего контроля (IC, желтый). В положительном тестовом образце изотермическая амплификация РНК SARS-CoV-2 приводит к изменению цвета с розового на желтый.


    Рисунок 6: Надежная чувствительность и специфичность

    Быстрый колориметрический LAMP-анализ SARS-CoV-2 был проведен с использованием либо положительных образцов. (общая РНК человека + синтетическая РНК SARS-CoV-2 в количестве 5000, 500 или 50 копий на реакцию), отрицательные образцы (только общая РНК человека) или без матрицы (NTC), как указано.A. Все положительные образцы дали положительный результат с устойчивым изменением цвета с розового на желтый, включая обнаружение во всех образцах при низком вводе 50 копий на реакцию (n = 20). B. Для отрицательных образцов не наблюдалось изменения цвета (n = 32). C. Сводка результатов аналогичного тестирования, проведенного 3 пользователями в 9 экспериментах. При 50 копиях на реакцию> 95% (277/288) реакций были положительными (желтый). Для отрицательных образцов> 99% (358/360) реакций не дали изменения цвета (розовый), а 2/360 реакций дали частичное изменение цвета (оранжевый, как указано звездочкой для пользователей 2 и 3).


    LAMP используется учеными всего мира в новых рабочих процессах для дальнейшего исследования COVID-19. Чтобы получить доступ к примечаниям к приложению, выбранным препринтам и узнать больше о серии публикаций NEB о COVID-19 Researcher Spotlight, нажмите здесь.

    Комплектующие

    В комплект поставки данного продукта входят следующие реактивы:

    NEB # Название компонента Компонент № Хранится при (° C) Сумма Концентрация
    Категории продуктов:
    Продукты изотермического усиления и вытеснения прядей,
    Продукты для ПЦР, количественной ПЦР и амплификации
    Приложения:
    Изотермическое усиление, опосредованное петлей,
    Изотермическое усиление,
    Амплификация ДНК, ПЦР и КПЦР

    Диагностический генетический тест на COVID-19 (мобильный)

    Обработка образцов — один из наиболее важных аспектов получения точных и надежных лабораторных результатов.Многие переменные, такие как соотношение антикоагулянтов, время и температура хранения, а также поверхность контейнеров и компонентов для рисования, могут повлиять на результаты теста.

    Machaon Diagnostics следует и рекомендует использовать третье издание руководства Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам (NCCLS) h31-A3: Сбор, транспортировка и обработка образцов крови для тестирования коагуляции и общих показателей коагуляции.

    По всем вопросам, связанным с доставкой, обращайтесь в лабораторию

    Сбор образцов

    Замороженная цитратная плазма
    Замороженная цитратная плазма — образец выбора для анализов свертывания крови и некоторых тестов ELISA.Антикоагулянт, используемый для этих анализов, составляет 105-109 ммоль / л, 3,13-3,2% дигидратной формы тринатрийцитрата (Na 3 C 6 H 5 O 7 2H 2 O), с буферизацией или без буферизации.

    Пациентам со значениями гематокрита выше 55% следует скорректировать конечную концентрацию цитрата с помощью следующего уравнения:

    X = (100 — PCV) / (595 — PCV) Объем WB

    Где X — объем цитрата, необходимый для приготовления объема цельной крови (объем WB) пациента с определенным процентным объемом упакованных клеток (PCV).

    Следуйте приведенным ниже рекомендациям по отбору образцов цитратной плазмы.

    • Обязательно соотношение антикоагулянта и цельной крови 1: 9
    • Кровь по возможности следует заливать непосредственно в антикоагулянт
    • Набранные шприцы следует добавить к антикоагулянту в течение 1 минуты
    • Для розыгрыша шприца следует использовать не более 20 мл шприца
    • Для заборов шприцев предпочтительнее использовать два шприца
    • Отборы коагуляции должны выполняться во 2-й или 3-й пробирке
    • Следует избегать извлечения катетера или по рекомендации лечащего врача
    • Все пробирки следует перевернуть не менее 4 раз, чтобы обеспечить надлежащее перемешивание
    • Подходящие иглы калибра от 19 до 22 для анализа коагуляции и тромбоцитов
    • Бесклеточная плазма должна содержать менее 10 000 тромбоцитов / мкл
    • Центрифугирование следует проводить при 1500 × g в течение 15 или более минут
    • Аликвоты замораживаются (<= -20ºC) быстро, чтобы минимизировать деградацию фактора
    • Образцы отправляются замороженными на сухом льду (-78.5ºC)

    Замороженная сыворотка
    Замороженная сыворотка является предпочтительным образцом для большинства тестов на определение иммуноглобулинов и многих тестов на основе ELISA. Цельную кровь набирают в стеклянную или пластиковую пробирку, возможно, содержащую активатор. Пожалуйста, следуйте инструкциям производителя труб по обращению с трубками и их обработке.

    Следуйте приведенным ниже рекомендациям по отбору образцов сыворотки.

    • Пластиковые пробирки с активатором необходимо перевернуть не менее 4 раз
    • Стеклянные пробирки без активатора необходимо свернуть на 2 часа при комнатной температуре
    • Подходящие калибры игл от 19 до 22 для тестов на основе сыворотки
    • Центрифугирование следует проводить при 1500 × g в течение 15 или более минут
    • Аликвоты замораживают (<= -20ºC) перед отправкой и отправляют на сухом льду (-78.5ºC)

    Цельная кровь с ЭДТА
    Цельная кровь с антикоагулянтом ЭДТА является образцом выбора для молекулярно-генетических тестов.

    Пожалуйста, следуйте перечисленным предложениям по сбору генетических образцов.

    • Кровь по возможности следует залить непосредственно в антикоагулянт
    • Извлеченная ДНК приемлема, если получена из лабораторий, сертифицированных CLIA
    • Это должна быть закрытая система подачи, чтобы предотвратить загрязнение
    • Все пробирки следует перевернуть не менее 4 раз, чтобы обеспечить надлежащее перемешивание
    • Подходящие калибры игл от 19 до 22 для предотвращения лизиса клеток
    • Для генетических анализов необходимо минимум 2 мл цельной крови
    • Для этого типа образца обработка не требуется
    • Отправляйте образцы этого типа при комнатной температуре

    Аликвотирование образцов
    Отправка нескольких аликвот (плазмы или сыворотки) для тестирования является важным аспектом тестов на сгусток, хромогенных и ИФА.Для большинства наших анализов требуются аликвоты по 1 мл. Перед отправкой их следует заморозить в морозильной камере с температурой <= -20 ° C или ниже. Пробирки следует поместить в штатив, чтобы образцы должным образом заморозились в основании пробирки. Замораживание должно произойти в течение 1 часа с момента розыгрыша. Пожалуйста, обращайтесь к предпочтительному количеству аликвот при отправке образцов.

    Доставка

    Отгрузка — важный аспект клинических испытаний. Пожалуйста, следуйте приведенным ниже инструкциям, чтобы упростить доставку в лабораторию.

    Местные грузоотправители
    Machaon Diagnostics заключает договор с Medical Couriers, Inc. (MCI). которые обслуживают весь район залива Сан-Франциско и прилегающие районы. MCI имеет парк специально обученных водителей, которые посетят вашу лабораторию, клинику или офис в определенное время. Курьеры перевозят сухой лед, холодные пакеты и контейнеры комнатной температуры для получения всех типов образцов.

    По телефону

    Medical Couriers, Inc. для индивидуальных запросов о доставке можно позвонить по указанному ниже номеру.

    Medical Couriers, Inc.
    (800) -652-1147

    Поместите подготовленные образцы и бланки заказа в транспортировочную сумку с указанием типа Machaon и образца на четком и видном месте.

    Грузоотправители, выезжающие за границу
    Соберите следующие предметы:

    • Форма контрольного заказа
    • Упаковочный материал или газета
    • Контейнер из пенополистирола, возможно с наружной картонной коробкой
    • Лента упаковочная
    • Авианакладная за ночные отгрузки
    • Этикетка ORM-A для грузов с сухим льдом (UN1845)
    • Сухой лед (-78.5ºC) достаточно для транзитного времени (5 фунтов в день)
    • Образцы в сумке для транспортировки биологически опасных образцов

    Упаковка
    Поместите пакет для биологических опасностей, содержащий образцы и бланк заказа на испытание, в контейнер из пенополистирола, а затем сухой лед. Заполните оставшееся пространство контейнера упаковочным материалом и заклейте упаковочной лентой. Наклейте заполненный авиаконструктор и этикетки с сухим льдом на внешней стороне контейнера на видном месте. Позвоните своему предпочитаемому ночному курьеру, чтобы запросить доставку или разместить контейнер в специально отведенном месте.

    По всем вопросам, связанным с доставкой, обращайтесь в лабораторию

    Подкасты

    Образование

    Антифосфолипидный синдром: критерии, некритерии и тройное положительное тестирование — видео с доктором Брэдом Льюисом и доктором Sciascia.

    Функциональные дефекты тромбоцитов, от клиники до генетики (вебинар, проведенный докторомБрэд Льюис, 24 февраля 2017 г.)

    Диагностика тромботических микроангиопатий: ТТП и атипичный HUS: (презентация Grand Rounds в Детской больнице Mattel, Калифорнийский университет в Лос-Анджелесе, педиатрической нефрологии с доктором Брэдом Льюисом)

    Путеводитель по видеоконтенту:

    00:24 — Введение (Почему мы должны заботиться о диагностике aHUS и TTP)
    1:00 — Что такое микроангиопатическая гемолитическая анемия (MAHA)?
    1:16 — Мазок крови с шистоцитами
    1:40 — Синтез белка фон Виллебранда
    02:09 — Патофизиология ADAMTS-13 и TTP
    02:43 — Как интерпретировать тестирование активности ADAMTS-13 и преимущества выполнения активности ADAMTS-13 тестирование с помощью Machaon Dx
    03:48 — Использование тестирования ADAMTS-13 для диагностики «оккультного» TTP
    04:40 — Определение входа или выхода aHUS с помощью тестирования активности ADAMTS-13
    05:20 — Обмен плазмы для пациентов с aHUS
    05: 57 — Каскад комплемента и патофизиология aHUS
    08:04 — Пациенты с aHUS реагируют на терапию экулизумабом
    08:45 — В отличие от TTP, aHUS имеет триггеры в 70% случаев
    09:26 — aHUS является мультисистемным микрососудистым заболеванием (вызванным aHUS повреждение органов)
    10:09 — презентация aHUS
    11:41 — Можно ли клинически дифференцировать TTP и aHUS?
    12:15 — 5 причин, почему вы должны заботиться о генотипировании пациентов с aHUS
    14:17 — Преимущества проведения генетического тестирования aHUS с помощью Machaon Dx
    14:52 — Изюминка: алгоритм диагностики aHUS и TTP

    Публикации

    Шапиро, н.э.и другие. Заместительная терапия плазминогеном для лечения детей и взрослых с врожденной недостаточностью плазминогена. Кровь . 2018; 131 (12): 1301–1310.

    Stromsness B. et al. Интерпретация врачом сомнительных результатов генетического тестирования aHUS сильно различается и часто расходится с лабораторными данными. Дж Клин Аферез . 2019; (аннотация П-82).

    Эро, депутат, Каин, Дж. С., изобретатели; Machaon Diagnostics, Inc., правопреемник. 2018.12.18. Метод диагностики комплемент-опосредованных тромботических микроангиопатий.Патент США US 10,155,983.

    Tao J. et al. Редкий случай синдрома Альпорта, атипичного гемолитико-уремического синдрома и паучиммунного серповидного гломерулонефрита. BMC Nephrology . 2018; 19: 355.

    Kain J. et al. Дополнительные гены, связанные с атипичным гемолитико-уремическим синдромом. ASN 2018 Реферат TH-PO713 . 2018; (абстрактный).

    Switala L. et al. Нарушения фактора комплемента обнаруживаются у пациентов с подозрением на гепарин-индуцированную тромбоцитопению (HIT), но не у пациентов с тромботической тромбоцитопенией пурпурой (TTP). ISLH 2017 Тезисы докладов . 2017; (абстрактный).

    Ipe T. et al. Чрезвычайно редкая мутация сайта сплайсинга в гене фактора комплемента I у пациента с атипичным гемолитико-уремическим синдромом. Дж Клин Аферез . 2017; 32 (6): 584-588.

    Alge J. et al. Гемолитико-уремический синдром как проявление мутации WT1 и синдрома Дениса-Драша: клинический случай. BMC Нефрология . 2017; 18 (1): 243.

    Чжан К.и другие. Атипичный гемолитико-уремический синдром: краткий обзор. Гематологические отчеты . 2017; 9 (2): 7053.

    Jensen G. et al. Потребление наттокиназы связано со снижением артериального давления и фактора фон Виллебранда, маркера сердечно-сосудистого риска: результат рандомизированного двойного слепого плацебо-контролируемого многоцентрового клинического исследования в Северной Америке. Интегрированный контроль артериального давления . 2016; 9: 95-104.

    Stromsness B. et al. Воспринимаемая клиническая полезность тестирования ADAMTS-13 быстро уменьшается, когда время выполнения превышает два дня. Инт Дж. Лаборатория Гематол . 2015; (абстрактный).

    Ero M. et al. Обнаружение нового варианта важно при попытке генетически подтвердить клинический диагноз комплемент-опосредованной тромботической микроангиопатии (ТМА). Дж Клин Аферез . 2015; (аннотация О-09).

    Harbert J. et al. Подавляющее действие рыбьего жира на образование тромбина, связанное с тромбоцитами, по данным калиброванной автоматической тромбограммы: исследование in vitro. Int Soc Thromb Hemost 2014; (аннотация 604).

    Ero M. et al. Влияние телаванцина на протромбиновое время и активированное частичное тромбопластиновое время, определяемое с помощью коагулометров в месте оказания медицинской помощи. Дж. Тромб Тромболизис . 2013; 38 (2): 235-240.

    Beattie DT. И другие. Исследование in vitro сердечно-сосудистых эффектов селективных агонистов рецепторов 5-HT4, Велусетраг и TD-8954. Дж Тромб Тромболизис . Сосудистая фармакология. 2013. 58: 150–156.

    Ero M. et al. Пилотное исследование сывороточной фармакокинетики наттокиназы у людей после приема однократной пероральной суточной дозы. Альтернативные методы лечения . 2013; 19 (3): 18-21.

    Хиггинс Д. и соавт. Неспособность тегасерода влиять на агрегацию тромбоцитов и тонус коронарных артерий в сверхтерапевтических концентрациях. Архив фармакологии . 2012; 385 (1): 103-9.

    Ng C. et al. Пероральная биодоступность наттокиназы (NSK-SD). Ам Дж. Клин Патол . 2010; 134 (доп.): 11.

    Lakshmi P. et al. Флавококсид, противовоспалительный агент растительного происхождения, не влияет на коагуляцию и не взаимодействует с антикоагулянтной терапией. Adv Ther . 2010; 27 (7): 1-12.

    Jeske WP. и другие. Выделение и характеристика гепарина из шкур тунца. Clin Appl Thromb Hemost . 2007 Апрель; 12 (2): 137-45.

    Fareed D. et al. Уровни оксида азота повышаются у пациентов с гиперкоагуляцией, связанной со злокачественными новообразованиями. Инт Дж. Лаборатория Гематол . 2005; (абстрактный).

    Jeske WP. и другие. Обзор моделей венозного тромбоза. Методы Мол Мед . 2004; 93: 221-37.

    Sahud et al.Ингибитор протеазы, расщепляющей фактор фон Виллебранда, у пациента с тромботической тромбоцитопенической пурпурой, связанной с синдромом иммунодефицита человека. Br J Haematol . 2002; 116 (4): 909-911.

    Fenton JW. и другие. Статиновые препараты и диетические изопреноиды подавляют пренилирование белков при передаче сигнала и являются антитромботическими и протромболитическими агентами. Биохимия . 2002; 67 (1): 85-91.

    Ero M. et al. Сравнительные эффекты новой смеси сульфатированных пентаманнановых олигосахаридов (PI-88), гепарина и родственных агентов на индуцированную тканевым фактором активацию тромбоцитов и профиль агрегации в цельной крови. Тромб Хемост . 2001; (аннотация 6260).

    Ero M. et al. Антитромбоцитарный препарат, тиклопидин, ингибирует индуцированные гепарином тромбоцитопенические реакции, измеренные агрегометрией тромбоцитов и высвобождением 14С серотонина. Тромбогемостаз . 1997; (абстрактный).

    Machaon Diagnostics — клиническая справочная лаборатория, специализирующаяся на диагностике и мониторинге коагуляции, тромбоцитов, редких заболеваний и генетики. Что делает нас уникальными, так это наша способность обеспечить высококачественное тестирование с непревзойденной скоростью .

    • Наша миссия спасти больше жизней с помощью лабораторных тестов .

    С 2003 года мы превратились в команду клиницистов, ученых, консультантов и технологов, обладающих более чем 400-летним опытом в области лабораторной медицины.

    Наши области клинической экспертизы включают: генетика редких заболеваний, расширенный гемостаз (тромбоциты и коагуляция), расстройства комплемента, нефрология, гематология / онкология, офтальмология, кардиология, иммунология и медицинское оборудование.

    Наше эзотерическое и дополнительное рутинное меню тестирования применимо к широкому спектру заболеваний и клинических ситуаций и, следовательно, привлекает внимание как национальной, так и международной клиентуры. В число наших клиентов входят университетские медицинские центры, сети систем здравоохранения, общественные больницы, коммерческие и исследовательские лаборатории, кабинеты врачей, биотехнологические фирмы и фармацевтические компании любого размера.

    CRO Услуги

    Machaon Diagnostics предлагает быстрое решение и комплексное решение для компаний, нуждающихся в услугах клинических испытаний, контрактных исследованиях и независимом подтверждении маркетинговых требований.Мы проводим исследования фармацевтических препаратов и медицинских устройств с 2003 года. Дизайн, набор субъектов, сбор / хранение образцов, тестирование, статистический анализ, отчеты об исследованиях и подготовка рукописей — все это входит в наши комплексные услуги. У нас есть обширная база данных хорошо охарактеризованных добровольцев, что позволяет нам завершить некоторые клинические испытания, одобренные IRB, всего за 5 недель. Наша тематическая база данных включает в себя нормальных взрослых, редкие заболевания, повышенный риск сердечно-сосудистых заболеваний, высокое кровяное давление, метаболический синдром и другие группы населения.Мы часто сотрудничаем с нашими более крупными партнерами по CRO, чтобы помочь в глобальных клинических испытаниях.

    Исследования и разработки

    Machaon Diagnostics — крупнейшая независимая специализированная лаборатория коагуляции в США. Мы — частная компания, в которой работают доктора медицины, доктора наук, лицензированные ученые-клинические лаборатории (CLS) и медицинские технологи.

    Как клиническая лаборатория, мы обеспечиваем уникальную среду тестирования для оценки тромботического и фибринолитического потенциала.Фармацевтические, приборные и биотехнологические соединения и материалы можно изучать в рамках установленных, проверенных и контролируемых клинических анализов с проверенными референсными диапазонами. Наши клинические испытания дополнительно контролируются в рамках наших политик и процедур обеспечения качества и проверки квалификации. Все тесты можно модифицировать или переконструировать для анализа наилучшего соответствия.

    Лаборатория Machaon Diagnostics расположена на территории медицинского центра в Окленде, штат Калифорния, со второй лабораторией в Новом Орлеане, штат Луизиана.Наши ученые опубликованы в области лабораторной медицины и увлечены ею.

    Разработка проб

    Наши сотрудники имеют обширный опыт разработки уникальных систем тестирования или применения надлежащей системы тестирования, чтобы быстро и точно ответить на вопросы клинических испытаний.

    Индивидуальные анализы , от ELISA до NGS, от Sanger до проточной цитометрии, от TEG до электрофореза, мы создаем индивидуальные анализы, чтобы дополнить наши уже существующие возможности тестирования, чтобы удовлетворить ваши потребности в тестировании.

    Machaon Diagnostics — это лицензированная несколькими штатами, аккредитованная CLIA, аккредитованная Колледжем американских патологов (CAP) клиническая лаборатория, уполномоченная предоставлять клинические лабораторные услуги высокой сложности. Все лабораторные испытания контролируются в рамках нашей Программы обеспечения качества, и исследования предлагаются в условиях надлежащей лабораторной практики (GLP, 21CFR, часть 58) / EN 13612.

    Обратитесь в лабораторию, чтобы узнать о любой из этих услуг.

    Почему такое имя, Махаон?

    Махаон (произносится «май-чай-он») — персонаж из «Илиады» Гомера (800 г. до н. Э.).C.) и ключевой фигурой в Троянской войне. Махаон, описанный как воин, хирург и целитель, был почитаем за спасение жизни Менелая, царя Спарты, мужа Елены и Филоктета, знаменитого вождя ахейцев. Под руководством царя Агамемнона Махаон спас этих и многих других воинов во время жестокой греческой и троянской войны.

    Что нужно знать

    Если вы читаете эту страницу, это, вероятно, означает, что ваш врач назначил вам тест на кровотечение или свертываемость и хотел бы, чтобы вы прошли этот тест в Machaon Diagnostics.Machaon Diagnostics — клиническая справочная лаборатория, специализирующаяся на тестировании на кровотечение и свертываемость, одна из немногих независимых лабораторий свертывания крови в стране. Мы проводим очень специфические и уникальные анализы крови, которые часто имеют решающее значение для помощи врачам в выборе правильного курса лечения.

    Machaon Diagnostics предоставляет специализированные лабораторные тесты для больниц и врачей по всей стране и признан за скорость и качество наших тестов.

    Важно знать, что ваша страховка может покрывать или не покрывать ваше тестирование.У нас есть большой опыт работы с пациентами, чтобы обеспечить им необходимое тестирование, и мы будем работать с вами, чтобы помочь найти решение, если ваша страховка не покрывает тестирование, которое мы предоставим.

    Если вы едете в Махаон на тест, вам нужно иметь при себе следующие вещи:

    • Приказ лаборатории вашего врача
    • Ваша страховая информация
    • Ваша идентификация
    • Список ваших текущих лекарств
    • Если вы собираетесь поступить из-за агрегации тромбоцитов, помните, что перед этим тестом вы должны голодать.

    Machaon Diagnostics была основана в 2003 году и является лицензированной в Калифорнии, аккредитованной CLIA, клинической лабораторией, аккредитованной Колледжем американских патологов (CAP), уполномоченной предоставлять клинические лабораторные услуги высокой сложности. Все лабораторные испытания контролируются в рамках нашей Программы обеспечения качества, и исследования предлагаются в условиях надлежащей лабораторной практики (GLP, 21CFR, часть 58) / EN 13612.

    При возникновении вопросов обращайтесь в лабораторию.

    Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


    Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

    Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

    • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
    • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
    • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
    • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
    • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

    Почему этому сайту требуются файлы cookie?

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


    Что сохраняется в файле cookie?

    Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

    Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.

    alexxlab / 20.09.1970 / Разное

    Добавить комментарий

    Почта не будет опубликована / Обязательны для заполнения *